小鼠成纤维细胞 PA317细胞

细胞名称：PA317     小鼠成纤维细胞

组织来源：胚胎

培养条件：DMEM +10% FBS

形       态：贴壁；成纤维细胞样

背       景：PA317细胞株源自TK- NIH/3T3细胞，通过pBR322中的包装结构DNA(pPAM3)和pBR322中的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因共同转染构建而成。 通过感染或转染将逆转录病毒载体导入这些细胞，结果生成可以感染许多哺乳动物细胞的双嗜性载体颗粒。 这株细胞生成的病毒颗粒已成功地用于将基因导入人类。 可能因为用于构建这株细胞而转入的DNA丢失，能够包装逆转录病毒载体的PA317细胞百分比随传代而减少。 在包含0.03 mM 次黄嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培养基中短暂(大约5天)选择，可以选出保留了包装功能的细胞。 选择后，细胞应在HT培养基(0.03 mM 次黄嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培养4天，以稀释残留的氨甲喋呤。

购买细胞注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

细胞基本技术

冻存细胞的复苏
小鼠成纤维细胞应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37.5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。
在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。
传代:
贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。
悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。
冻存 
 将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。 
小鼠成纤维细胞
支原体污染及检测：
  （1）.支原体污染在细胞培养中*常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于**和病毒之间的目前所知能独立生活的*小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，*小直径0.2um，可通过滤器。
 小鼠成纤维细胞
 支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。
 经过严格质控，不含有**、**、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。
 （2）.支原体污染后，培养基可不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。目前，支原体检测的方法有以下几种。
（a）.相差显微镜观察；
（b）.低张处理地衣红染色法；
（c）.荧光染色法；
（d）.酶标法；
（e）.PCR法：基础医学细胞中心使用该方法进行检测。
               优点：灵敏度高，检测耗时短，样品量小
              （只需50ul细胞培养用液上清）。
            缺点：引物及制剂费用较高。
               
                ★★★★★希望这些基本技术及资料可以帮到您★★★★★
小鼠成纤维细胞
特点：
1.传代情况：P2 
2.活性好、稳定性高、适应性强，易培养
3.传代快、多：2-3天传一代，普通可传10代以上 肿瘤细胞无限制
4.纯度高达95% 无污染和其他杂细胞
5.有技术疑问可以提供一对一的解答：专业，及时，耐心
6.货期短，一般冻存管5-7个工作日，复苏7-15个工作日。

 ★我库细胞近3000种，来源于美国ATCC.
      种属来源：小鼠、大鼠、人、猴、牛
      组织来源: 各组织癌细胞、表皮细胞、上皮细胞、等等....
      细胞都是经过严格质量控制。

yb-axbz-050 大鼠正常肝细胞 BRL-3A 规格25毫升/株.
yb-axbz-051 大鼠肝细胞 BRL大鼠Buffalo 规格25毫升/株.
yb-axbz-052 小鼠成纤维细胞 3T3 规格25毫升/株.
yb-axbz-053 小鼠Mo-MuLv感染的3T3细胞 Mo-MuLV/3T3 规格25毫升/株.
yb-axbz-054 小鼠成纤维细胞 3T3NIH 规格25毫升/株.
yb-axbz-055 逆转录病毒包装的NIH3T3细胞 PA317 规格25毫升/株.
yb-axbz-056 小鼠成纤维细胞 L929 规格25毫升/株.
yb-axbz-057 小鼠脂肪细胞 L13T3 规格25毫升/株.
yb-axbz-058 小鼠巨噬细胞 Ana-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-059 小鼠精母细胞 规格25毫升/株.
yb-axbz-060 中国仓鼠肺细胞 CHL 规格25毫升/株.
yb-axbz-061 中国仓鼠卵巢细胞 CHO 规格25毫升/株.
yb-axbz-062 中国仓鼠仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1 规格25毫升/株.
yb-axbz-063 转血小板基因仓鼠卵巢细胞 CHO-pt 规格25毫升/株.
yb-axbz-064 转入Tet-off调控，含EGFP基因的CHO细胞 CHO-AA8 规格25毫升/株.
yb-axbz-065 绿猴肾细胞 Vero 规格25毫升/株.
yb-axbz-066 非洲绿猴非洲绿猴肾细胞 VERO C1008 (E6) 规格25毫升/株.
yb-axbz-067 猴肾细胞系 VERO E6 规格25毫升/株.
yb-axbz-068 SV40转化的非洲绿猴肾细胞 COS-7 规格25毫升/株.
yb-axbz-069 狗肾细胞 MDCK 规格25毫升/株.
yb-axbz-070 大鼠肝星形细胞 CFSC-8B 规格25毫升/株.
yb-axbz-071 大鼠肝星形细胞 CFSC-2G 规格25毫升/株.
yb-axbz-072 大鼠肝星形细胞 CFSC-3H & 5H 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-axbz-073 大鼠肝上皮样干细胞 WB-F344 规格25毫升/株.
yb-axbz-074 鼠肌原细胞 C2C12 规格25毫升/株.