iTRAQ

1. 简介

iTRAQ技术是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行**和相对定量研究的方法。这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。iTRAQ实际上是一种同位素标记试剂，包括一个带电荷的报告基团，报告基团有4种相对分子质量分别为114、115、116和117，另外还有一个肽段反应基团和一个平衡基团，平衡基团也有4种相对分子量分别为31、30、29和28。其中平衡基团平衡分子量，保证与每一种报告基因结合后iTRAQ试剂总的相对分子量都是145，肽段反应,基团可以同肽段的N末端和赖氨酸测量E氨基基团发生反应，这样可以标记生物样品中产生的所有肽段，增强任一给定蛋白的肽段覆盖度，同时保留了诸如一些蛋白的翻译后修饰的重要结构信息。

2. 技术特点和优势

（1）分离能力强、分析范围广、分析时间快、分离效果好；

（2）标记效率高；

（3）重复性较高，可以简化谱的复杂程度，提高离子强度；

（4）定性分析结果可靠，可同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息；

（5）定性与定量同时进行

（6）iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白，还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。还可以

技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。

3. 操作流程

（1）样品获取；

（2）蛋白提取及浓度测定；

（3）蛋白酶解；

（4）用iTRAQ试剂对酶解后的样品蛋白进行差异标记；

（5）混合标记的样本；

（6）结合多维色谱分离和2D液相色谱串联质谱进行分析；

（7）差异蛋白分析。

4. 样本要求

iTRAQ技术对检测标本有一定要求。它要求检测蛋白量*低不少于50ug，浓度*低不少于5ug/uL，否则同位素无法标记。而对蛋白提取试剂也要求使用普通的组织、细胞裂解液即可，切忌不要使用二维电泳试剂提取。

5. 技术应用

（1）广泛地应用于**、酵母、人体组织、细胞和体液等多种样本的蛋白质鉴定和定量；

（2）可以应用与比较野生型酵母菌株和两种同源突变型酵母菌株xmlv、upflv蛋白质表达差异；

（3）可以对多种蛋白混合物或重组的蛋白混合物进行**地定量；

（4）可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测；

（5）可以进行细胞周期、信号转导整个过程的蛋白质组动态变化检测。

备注： 样本处理：普通样本免费做样本前处理；特殊样本另外收取300元/样本处理费，如羊水、血清等需要去高 丰度蛋白的样本，特殊动植物组织（如骨头、木质部、果实、种子等），革兰氏阳性**，分泌蛋白，细胞 器蛋白（如叶绿体、线粒体、膜蛋白等），微量样本、寄生虫、病毒或其他具有强致病性的菌类。

武汉华联科生物技术有限公司