K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨细胞) K7M2 wt

【细胞缩写】 K7M2 wt细胞

【细胞名称】 K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨细胞)

【背景资料】 见细胞说明书

【细胞来源】 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN以及少数国内外大学建系

【代次】 P4

【规格】 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

【细胞数】 1*10（6）

【生物**级别】 1

【生物体】 小鼠

【组织来源】 BALB/c骨肉瘤；转移灶：肺

【细胞形态】 成骨细胞样

【细胞特性】 贴壁

【细胞活力】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【细胞检测】 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、**、酵母和**

【培养条件】 详见细胞说明书

【传代方法】 建议1:2-1:3 两天换液一次

【冻存条件】 详见细胞说明书

【主要文献】 请具体查阅相关发表文章

3）随细胞有一份细胞操作说明书，请客户仔细查看。

4）记得加1%双抗，降低被污染的概率。另外尽早冻存留种，以备后用。

5）售后时间为一周，**于细胞本身的质量问题，而因乙方自己不当操作（不规范操作，消化过度，不加双抗导致的污染等）导致的细胞问题不在售后范畴。
6）收到细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请您务必重视。
7）刚收到细胞时，胎牛血清可以用15%培养两三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞状态稳定后，再调回10%即可。
（其中1,2条针对于贴壁细胞，悬浮细胞详情请见细胞操作说明书）
K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨细胞)传代操作步骤：
（一）贴壁细胞传代
1）提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2）吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3）加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4）用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5）将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
（二）悬浮细胞传代
1）将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2）弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3）将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

人前脂肪细胞 ：人类白色前成脂肪细胞（HWP）分离自不同位置的成年人皮下或肠道组织。脂肪组织主要用于能量储存以及代谢内稳态。脂肪组织的增加源于成熟脂肪细胞增大或脂肪前体细胞分化（前成脂肪细胞）为新的成熟的脂肪细胞。这些前成脂肪细胞已经存在于脂肪组织。它们可以分化直到成熟，并替代分化为成熟脂肪细胞的细胞。由于该细胞分化过程由各种生长因子和**控制，所以前成脂肪细胞适用于研究控制细胞增生、细胞分化和脂肪组织功能的生理学机制。

人骨骼肌细胞 ：人类骨骼肌细胞（SkMC）分离自不同的成年人供者骨骼肌。这些细胞的肌原纤维节的肌球蛋白阳性，平滑肌特异á-肌动蛋白以及内皮细胞特异血管假性血友病因子（vWF）阴性。新的骨骼肌细胞从静息肌原细胞获得，也称为卫星细胞，定位于基底膜和肌纤维膜之间的肌肉纤维中。静息肌原细胞可以通过刺激而激活，例如肌肉损伤。细胞激活之后，肌原细胞开始增生并融合受损的肌肉纤维，或者一个个形成新的肌管。SkMC*适用于活体外肌肉研究。这些细胞在富含促细胞分裂剂的骨骼肌细胞生长培养基中可以很快地增生。和典型的多核复合胞体融合进入肌管可以通过使用骨骼肌细胞。

人平滑肌细胞 ：平滑肌细胞可以形成无横纹的肌肉，在结构和功能方面，均与骨骼肌细胞和心肌细胞不同。这些细胞定位于血管壁和空心器官，例如膀胱、**和胃肠道，并且负责不自主运动，例如蠕动收缩，后者促进食物沿着胃肠道移动。平滑肌细胞可以从主动脉、冠状动脉、肺动脉、脐动脉、气管、支气管、膀胱和**获得。

细胞常见问题及解决方案：
1）培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2）细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。3）对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
4）对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨细胞)购买细胞注意事项：
1）收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2）仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3）用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4）建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。