猪25羟基维生素D3检测试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪25羟基维生素D3水平。用纯化的猪25羟基维生素D3捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入猪25羟基维生素D3，再与,HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪25羟基维生素D3呈正,相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪25羟基维生素D3检测试剂盒含量。

本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联**吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为抗人IL－2单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体，经生物素（biotin,）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

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ELISA试剂盒实验具有以下特点：1.专一性强。2.灵敏度高。3.样品易保存。4.结果易观察。5.可以定量测定。6.可以大规模测定样品。