国家标准规定的测定游泳池水中尿素的方法是二乙酰一肟法(GB/T 18204.29-2000)[1]，但该法的产物遇光褪色[2]，因此目前有的实验室试用脲酶法检测游泳水中的尿素。为了解脲酶法是否能够达到国家规定的检测标准，我们进行了以下实验。
1 材料和方法
1.1 试剂
1.1.1 二乙酰一肟法 所用试剂均按GB/T 18204.29-2000配制。
1.1.2 脲酶法 试剂系采用卫生部上海生物制品研究所的尿素测定试剂盒。内含4种试剂：①脲酶（冻干）：临用前加23.0ml pH8.0缓冲溶液溶解。②pH8.0缓冲溶液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成。③显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成。④显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成。
1.1.3 尿素标准储备液（100mg/L） 准确称取0.1000g尿素于小烧杯中，加入少量纯水溶解后转入1000ml容量瓶中，加0.1ml三氯甲烷并用纯水定容，此溶液每毫升含100μg尿素，冷藏保存。
1.1.4 尿素标准使用液（10mg/L） 准确吸取尿素标准储备液（100mg/L）10.0ml于100ml容量瓶中，用纯水定容，此溶液每毫升含10μg尿素。
1.2 主要仪器 7230G型分光光度计（上海分析仪器厂）
1.3 实验方法
1.3.1 二乙酰一肟法 严格按GB/T18204.29-2000 规范操作。
1.3.2 脲酶法 吸取1.00ml水样于10ml比色管中，另取10ml比色管9支，分别加入10mg/L尿素标准使用液0.0，0.1，0.3 ，0.5，0.7，0.9，1.1，1.3，1.5ml，向水样和标准系列中分别加入脲酶溶液0.5ml，混匀，于37℃水浴中保温15分钟，然后向各管分别加入显色剂Ⅰ显色剂Ⅱ各2.5ml，混匀，定容至10ml，再于37℃水浴中保温20分钟取出，冷却至室温，于550nm波长下，1cm比色杯，空白调零读取各管吸光度。
2 结果
2.1 标准曲线比较 二乙酰一肟法作为国标推荐方法，已经成熟，线性方程x=0.003105y+0.001065，相关系数γ=0.9994。脲酶法经本实验测定，在0～20mg/L范围内线性良好，线性方程x=0.009125y+0.008136，相关系数γ=0.9991。
2.2 精密度比较 取三组不同浓度的水样分别测定7次，两种方法所得结果相对偏差均小于5%，说明两种方法有教高的精密度（表略）。
2.3 准确度比较 取10个不同水样加入不同的尿素标准，用两种方法分别测定，计算回收率，结果见表2（略）。
2.4 对比实验 分别取13个样品，用两种方法测定，其结果经统计软件计算，P>0.05，两种方法无显著性差异，见表3(略)。
3 讨论 二乙酰一肟法的优点在于方法已经成熟，应用广泛，精密度好，且是目前**直接化学分析尿素的方法[2]。缺点是煮沸时间长，反应不稳定，需用棕色比色管，产物遇光褪色。二乙酰一肟及安替比林保存时间短，*好现用现配。而脲酶法却能克服二乙酰一肟法的缺点，且该法具有良好的线性，灵敏度高，精密度好，不需要避光操作和煮沸。采用脲酶法的本实验数据可以得出基本达到国家标准要求的结论，但它毕竟不是国标，一旦遇纠纷，还是应以二乙酰一肟法为准。
4 参考文献
1. 中华人民共和国卫生部.公共场所卫生标准检验方法.**版.北京:中国标准出版社,2000:120.
2. 金有余,主编.临床生化检验学.**版, 北京:海洋出版社,1993:251.
1 材料和方法
1.1 试剂
1.1.1 二乙酰一肟法 所用试剂均按GB/T 18204.29-2000配制。
1.1.2 脲酶法 试剂系采用卫生部上海生物制品研究所的尿素测定试剂盒。内含4种试剂：①脲酶（冻干）：临用前加23.0ml pH8.0缓冲溶液溶解。②pH8.0缓冲溶液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成。③显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成。④显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成。
1.1.3 尿素标准储备液（100mg/L） 准确称取0.1000g尿素于小烧杯中，加入少量纯水溶解后转入1000ml容量瓶中，加0.1ml三氯甲烷并用纯水定容，此溶液每毫升含100μg尿素，冷藏保存。
1.1.4 尿素标准使用液（10mg/L） 准确吸取尿素标准储备液（100mg/L）10.0ml于100ml容量瓶中，用纯水定容，此溶液每毫升含10μg尿素。
1.2 主要仪器 7230G型分光光度计（上海分析仪器厂）
1.3 实验方法
1.3.1 二乙酰一肟法 严格按GB/T18204.29-2000 规范操作。
1.3.2 脲酶法 吸取1.00ml水样于10ml比色管中，另取10ml比色管9支，分别加入10mg/L尿素标准使用液0.0，0.1，0.3 ，0.5，0.7，0.9，1.1，1.3，1.5ml，向水样和标准系列中分别加入脲酶溶液0.5ml，混匀，于37℃水浴中保温15分钟，然后向各管分别加入显色剂Ⅰ显色剂Ⅱ各2.5ml，混匀，定容至10ml，再于37℃水浴中保温20分钟取出，冷却至室温，于550nm波长下，1cm比色杯，空白调零读取各管吸光度。
2 结果
2.1 标准曲线比较 二乙酰一肟法作为国标推荐方法，已经成熟，线性方程x=0.003105y+0.001065，相关系数γ=0.9994。脲酶法经本实验测定，在0～20mg/L范围内线性良好，线性方程x=0.009125y+0.008136，相关系数γ=0.9991。
2.2 精密度比较 取三组不同浓度的水样分别测定7次，两种方法所得结果相对偏差均小于5%，说明两种方法有教高的精密度（表略）。
2.3 准确度比较 取10个不同水样加入不同的尿素标准，用两种方法分别测定，计算回收率，结果见表2（略）。
2.4 对比实验 分别取13个样品，用两种方法测定，其结果经统计软件计算，P>0.05，两种方法无显著性差异，见表3(略)。
3 讨论 二乙酰一肟法的优点在于方法已经成熟，应用广泛，精密度好，且是目前**直接化学分析尿素的方法[2]。缺点是煮沸时间长，反应不稳定，需用棕色比色管，产物遇光褪色。二乙酰一肟及安替比林保存时间短，*好现用现配。而脲酶法却能克服二乙酰一肟法的缺点，且该法具有良好的线性，灵敏度高，精密度好，不需要避光操作和煮沸。采用脲酶法的本实验数据可以得出基本达到国家标准要求的结论，但它毕竟不是国标，一旦遇纠纷，还是应以二乙酰一肟法为准。
4 参考文献
1. 中华人民共和国卫生部.公共场所卫生标准检验方法.**版.北京:中国标准出版社,2000:120.
2. 金有余,主编.临床生化检验学.**版, 北京:海洋出版社,1993:251.
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