人白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA Kit 96T

原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的

试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③

酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的

具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
    （一）双抗体夹心法
     双抗体夹心法：是检测抗原*常用的方法，操作步

骤如下：
    （1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体

：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
    （2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时

间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相

抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
    （3）加酶标抗体：使固相**复合物上的抗原与酶

标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体

上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
    （4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有

色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
    根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶

标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
    （二）双位点一步法
    在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上

两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶

标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两

步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反

应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和

特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的

ELISA提高到新水平。
    在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），

类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗

原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结

合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。

钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
   （三）间接法测抗体
    间接法是检测抗体*常用的方法，其原理为利用酶标

记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接

法。操作步骤如下：
    （1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原

：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
    （2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结

合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只

留下特异性抗体。其他**球蛋白及血清中的杂质由于不

能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
    （3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，

从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶

量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种**的抗体

，可用酶标羊抗人IgG抗体。
     每个试剂盒操作是不同的，请按说明书操作。具体

事项请来电咨询！