技术服务样品的处理、保存及运输

技术服务样品的处理、保存及运输

荧光定量PCR试验、western blot实验、SNP实验、SSH试验、的样品准备

一、动物组织样品保存与运输

1.       新鲜组织样品的保存与运输

A、 使用RNA/ater试剂

1.       取新鲜组织（注：生物体死亡后尽快在10分钟内取材）。组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在0.5cm一下（长宽不限），然后放入装有5倍体积RNA/ater的离心管（或冻存管）中。

2.  4⁰C孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNA/ater，然后转入-20⁰C中保存。样品在-20⁰C不会冻结，但是溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后学的RNA抽提。冻存样品也可以反复冻溶，其RNA含量和完整性不受影响。

3.       RNA/ater处理的标本可用常规冰袋4⁰C低温运输（无需使用干冰-70⁰C运输）。

B．使用Trizol试剂

Trizol试剂可抑制RNA酶活性，破坏细胞膜结构以分裂解细胞释放出RNA。

1.       取新鲜组织（注：生物体死亡后1分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50-100mg组织加1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，操作*好在冰上进行。

匀浆的裂解液4⁰C短期保存（1个月），-20⁰C或--70⁰C长期保存。干冰运输，短期（5天以内）冷藏（4⁰C）运输亦可。

2.       冻存组织的保存与运输

生物体死亡后尽快（*好在10分钟内）切取新鲜组织，以PBS或生理盐水清洗干净切为小块，立刻放入液氮中冷冻3小时后可转入-70⁰C冰箱保存或者一直保存在液氮中。冻存组织可放入干冰中直接运输，或者以Trizol 4⁰C以下匀浆：冻存的组织块以液氮研磨后加Trizol或者直接加Trizol以电动匀浆器匀浆，匀浆的裂解液干冰运输或者短期（5天以内）冷藏（4⁰C）运输。

二、哺乳动物培养细胞样品采集、保存与运输——使用Trizol 试剂（不建议使用RNAlater）

1.         悬浮细胞

1.       悬浮细胞培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液

2.       细胞沉淀（1*10⁷个细胞）中加入1ml的Trizol 裂解液

3.       反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。-70⁰C保存或干冰运输。注：Trizol处理的标本冷藏（4⁰C）运输，短期（5天以内）亦可。

2.贴壁细胞

1.从培养容器中吸出并弃去培养液

2.培养瓶中直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，约15cm² 细胞贴壁面积加入1.ml Trizol

3.反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。-70⁰C保存或干冰运输。注：Trizol处理的标本冷藏（4⁰C）运输，短期（5天以内）亦可。

注：

1.本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限制，建议以Trizol 处理。

2.所使用的1.5ml冻存管或离心管、枪头等必须高温**，装好样品后管口需要以封口膜封好。

3.如需干冰，快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

植物组织样品准备

组织需要量：

100mg-1g，根据职务不同部位的组织决定组织需要量（尽可能量多些，但不必超过1g）

保存和运输方法

准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好，立刻投入液氮中保存。冻存组织可用干冰或液氮运输。

注：

1.所使用的1.5ml冻存管或离心管、枪头等必须高温**，装好样品后管口需要以封口膜封好。

2.快递运输所用的干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

蛋白芯片实验、转录因子芯片实验和**印迹实验的样品准备

悬浮细胞：

约1*10⁷ 个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2-5ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70⁰C冰箱保存。干冰运输。

贴壁细胞：

约1*1*10⁷ 个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2-5ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70⁰C冰箱保存。干冰运输。

组织：

采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取好材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或-70⁰C冰箱中保存，干冰运输。

血清和血浆：

采用新鲜血液，分离血清和血浆后放入-20C或-70⁰C冰箱中保存，干冰运输。检测蛋白芯片血清约需要100-200ul的量。

注：

1.本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限制，建议以Trizol 处理。

2.所使用的1.5ml冻存管或离心管、枪头等必须高温**，装好样品后管口需要以封口膜封好。

3.如需干冰，快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

WB样本采集、保存和运输

悬浮细胞：

约1*10⁷ 个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2-5ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70⁰C冰箱保存。干冰运输。

贴壁细胞：

约1*1*10⁷ 个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2-5ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70⁰C冰箱保存。干冰运输。

组织：

采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取好材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或-70⁰C冰箱中保存，干冰运输。

为获得理想结果，建议根据下述方法处理、保存及运输细胞样品

悬浮细胞：

1.                     取10⁷ 个细胞低速离心，用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中。

2.                     加入270ul 37%的甲醛（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育10分钟；该步骤*好在通风橱中完成，

3.                     加入1ml 1.25M的苷基酸（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育5分钟，中和甲醛。

4.                     2000xg离心5分钟，弃上清，用预冷的1×PBS/EDTA洗细胞两遍。

5.                     200xg离心5分钟，弃上清。

6.                     收集到的样品-80⁰C冻存，干冰运输。

贴壁细胞

1.将10cm培养皿中（10⁷细胞）旧的培养基吸掉，添加10ml新鲜培养基。

2.加入270ul 37%的甲醛加入270ul 37%的甲醛（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育10分钟；该步骤*好在通风橱中完成，

3.加入1ml 1.25M的苷基酸（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育5分钟，中和甲醛。

4.将皿中的混合液吸掉，用预冷的1xPBS/EDTA洗细胞两遍，加入1ml含有1xprotease inhibitor cocktail 的1xPBS，用细胞将皿底的细胞刮下，收集到1.5ml离心管中。

5.2000xg离心5分钟，弃上清。

6.收集到的样品-80⁰C冻存，干冰运输。

注：

1.                     所使用的1.5ml冻存管或离心管，枪头等必须高温**，装好样品后管口需要以封口膜封好。

2.                     快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封

 

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