细胞周期素D2(CCND2)重组蛋白

细胞周期素D2(CCND2)重组蛋白将目的基因连接在表达载体后，通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外，在终止子前有6个His编码序列，便于蛋白的亲和层析纯化。细胞周期素D2(CCND2)重组蛋白Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.如果需要有生物活性的蛋白，请参见活性蛋白。

细胞周期素D2(CCND2)重组蛋白

来源： 原核表达

宿主：E.coli

内**水平：<1.0EU/µg(LAL法测定)

亚细胞定位：Secreted

预测分子量：15.7kDa

实际分子量：-(差异分析请参阅说明书)

片段与标签：Thr21~Pro152 (Accession # Q6ISS4) with N-terminal His Tag

缓冲液成份磷酸盐缓冲液：（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性状：冻干粉

纯度> 95%

等电点：5.5

应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.如果需要有生物活性的蛋白，请参见活性蛋白。。   

规格：10µg 50µg 200µg 1mg 1g

细胞周期素D2(CCND2)重组蛋白实验步骤：

1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。

2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。

3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。

4.双酶切，插入到目标载体。

5.转化。

6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。

7.SDS-PAGE检测。

8.挑选高表达的多个克隆，测序。

细胞周期素D2(CCND2)重组蛋白的表达策略优点和缺点：

细胞周期素D2(CCND2)重组蛋白分离纯化原则总结：

1.应尽可能利用蛋白质不同物理特性选择所用的分离纯化技术，而不是利用相同技术多次纯化；

2.不同的蛋白在性质上有很大区别，每一步纯化步骤都应当充分利用目的蛋白和杂质成分物理性质差异；

3.在纯化早期阶段要尽量减少处理体积，方便后续纯化；

4.在纯化后期阶段，再使用造价高的纯化方法，有利于纯化材料的重复使用，减少再生复杂性。

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