Quick Cell支原体快速检测试剂盒(细胞培养专用) C4056L1060

Quick Cell支原体快速检测试剂盒(细胞培养专用)

《Quick Cell快速支原体检测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品（如血清）中是否含有支原体污染，该试剂盒仅用于基础科研。 哺乳动物细胞的培养，支原体（Mycoplasma）污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误。从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。

本试剂盒可以检测：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3）M.Arginini、（4）M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）Acholeplasma Laidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis等几乎所有常见的污染细胞的支原体（注：M.为Mycoplasma的缩写）。以上13种支原体约占细胞支原体污染的99%以上，本试剂盒产品全部可以检测。绝大多数支原体污染集中于前8种。注意：本试剂盒无法检测Ureaplasma Urealyticum支原体！Ureaplasma Urealyticum在支原体污染种极其罕见。

与PCR法检测支原体比较，本试剂盒产品优势优势显著：

使用方法 

1. 反应

（1）取三个反应管，分别标记为阳性对照管（Positive）、测试管（Test）和阴性对照管（Negative），各加入25 μL的水化溶液（-20℃保存的水化液可以放37℃水浴融化），吹吸数次直到所有冻干粉剂彻底溶解（冻干品较难溶解，需要缓慢吹吸约20-50下。此过程，如有大气泡产生或者小气泡过多，必须去除，否则严重影响反应结果！气泡可以用套管离心的方法去除）。尽量在没有操作过支原体的房间进行上述步骤。将所有反应管盖子盖上，在另外一个房间内进行下一步的操作。

（2）往阳性对照管中加入1 μL阳性支原体DNA，测试管中加入1 μL待测细胞培养液，阴性对照管不加。

（3）水浴内反应：往每个反应管内加入25 μL矿物油，以防止水份挥发，盖上盖子，将反应管插入带孔的漂板内，放入已经升温到61℃的水浴内，准确反应60分钟。

注：a 试剂盒所用的酶对温度敏感，器显示温度与实际温度的温差尽量不超过0.5℃。如果温差超过2℃，将导致酶活性降低，扩增速度也降低，在规定的反应时内，阳性             对照可能无法呈现典型的蓝绿色。此时需用水银温度计校准水浴的温度。

    b 如方便使用PCR仪，强烈建议在PCR仪上进行反应，这样可以准确控制反应的时间和温度。PCR仪参数如下：61℃，60 min；20℃, ∞；热盖温度，100 ℃。

  c 在带热盖的PCR仪上进行反应，无需在反应管内加入矿物油。

 2. 结果判断

 61℃反应60分钟后，立刻取出反应管，放于室温。以一张白纸或白色泡沫盒（优选白色泡沫）为背景，通过反应管溶液颜色的变化，即可判断检测结果。如果溶液为蓝绿色，则说明有支原体污染；如果为粉红色或紫红色，则说明没有支原体污染（如图1）。

注：a 有时，同一批次阴性反应之间的颜色也可能会略有差异属于正常现象，比如有些呈粉红色，有些呈紫红色。只在待测样品与阳性对照一样呈典型的蓝绿色时，可判定为阳性，有支原体污染。

  b 反应结果的判断，必须在反应后2小时内进行判断，因为即使在室温，扩增反应也会缓慢进行，反应管颜色也会逐渐变化，反应后长时间放置，可能出现错判。