人DHVD3(1,25二羟基维生素D3) ELISA KiT(酶联**试剂盒) wi98299
产品简介
人DHVD3(1,25二羟基维生素D3) ELISA KiT(酶联**试剂盒) DHVD3(1,25二羟基维生素D3),1, 25-dihydroxyvitamin D3,1,25二羟基维生素D3,DHVD3(1,25二羟基维生素D3)是维生素D在体内的高度活性形式,皮肤中的7脱氢胆固醇在阳光或紫外光照射下转化成维生素D3,
产品详细信息
人DHVD3(1,25二羟基维生素D3) ELISA KiT(酶联**试剂盒) 工作原理】
DHVD3(1,25二羟基维生素D3),1, 25-dihydroxyvitamin D3,1,25二羟基维生素D3,DHVD3(1,25二羟基维生素D3)是维生素D在体内的高度活性形式,皮肤中的7脱氢胆固醇在阳光或紫外光照射下转化成维生素D3,在肝经25羟化酶系和肾脏1α羟化酶羟化作用下形成DHVD3(1,25二羟基维生素D3),是其在机体内发挥调节作用的基本形式。DHVD3(1,25二羟基维生素D3)是**症活动的天然调节剂,不仅能预防MS的发生,还可降低**的活动度,并且适当的血药浓度还可降低并发症(骨折及肌无力等)的发生。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联**吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体为多克隆DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体。检测相DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体也为多克隆DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
【每套试剂盒中内容】(96T)
材料 数量
标准品 96T(2vial)
预包被DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体的96孔板 96T(8×12)
生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体 96T (1:100)
浓缩ABC(亲和素-过氧化物酶复合物) 96T (1:100)
样品稀释液 96T×2
DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体稀释液 96T×1
ABC稀释液 96T×1
TMB显色液A 96T×1
TMB显色液B 96T×1
TMB终止液 96T×1
ELISA专用TBS洗涤液 96T×1(1:25)
【需要而未提供的试剂和器材】
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 自动洗板机。
4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5. 蒸馏水,容量瓶等
6. 干净的试管和Eppendorf管。
【注意事项】
1. 从-20℃取出的试剂盒,*好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀,避免解冻时出现的分层,否则会出现浓度不均一的现象。
2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3. 配制各种试剂时,切记混匀!
4. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
5. 建议所有标准品、样本都做双份检测。
6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活!
7. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。
【洗板方法】
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液,室温凝固2小时或4℃过夜,离心1000×g 10分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
【试剂的准备和保存】
A. 标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液,彻底溶解混匀后做倍比稀释。
稀释后的标准品在2小时内使用。
B.生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体工作液:在使用前2小时内准备。
1. 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实际配制时应多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体加DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
C.亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前1小时内准备。
1. 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实配时应多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D. TMB显色工作液的准备:在使用之前30分钟,按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。
【操作程序】
1. 确定本次检测所需的已包被DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体的酶标板孔数目。
2. 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3. 酶标板加上盖,37℃反应90分钟。
4. 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5. 将准备好的生物素DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。
7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应*长不要超过30分钟)。
10. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。
【操作程序总结】:
准备试剂,样品和标准品
加入准备好的样品和标准品,37℃反应90分钟
洗板2次,加入生物素化DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体工作液,37℃反应60分钟
洗板3次,加入ABC工作液,37℃反应30分钟
洗板5次,加入TMB显色液,37℃反应
加入TMB终止液
30分钟之内读OD值
计算标本待测因子含量
【检测范围】:1000pg/ml→15.6pg/ml。
【敏感性】: <3pg/ml
【特异性】: 系统和其它因子无交叉反应。
【保存】: -20℃ [短期内(如两周)可4℃]
【有效期】: 12个月(-20℃)。
【用途】: 用于体外定量分析液体标本(通用型)。
【REFERENCES】
1. PARK C W. OH Y S.SHIN Y S Intravenous calcitriol regresses myocardial hypertrophy in hemodialysis patients with secondary hyperparathyroidism 1999.
2. MOHTAI M. YAMAMOTO T Smooth muscle cell proliferation in the rat coronary artery induced by vitamin D 1987.
3. CARTHY E P.YAMASHITA W.HSU A 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 and rat vascular smooth muscle cell growth 1989.
4. SHOJI T.NISHIZAWA Y.NISHITANI H Impaired metabolism of high density lipoprotein in uremic patients 1992.
5. LIM P S.HUNG T S.YEH C H Effects of treatment of secondary hyperparathyroidism on the lipid profile in patients on hemodialysis 1998.
6. 0SHOJI T. FUKUMOTO M. KIMOTO E Antibody to oxidized low-density lipoprotein and cardiovascular mortality in end-stage renal disease 2002.
DHVD3(1,25二羟基维生素D3),1, 25-dihydroxyvitamin D3,1,25二羟基维生素D3,DHVD3(1,25二羟基维生素D3)是维生素D在体内的高度活性形式,皮肤中的7脱氢胆固醇在阳光或紫外光照射下转化成维生素D3,在肝经25羟化酶系和肾脏1α羟化酶羟化作用下形成DHVD3(1,25二羟基维生素D3),是其在机体内发挥调节作用的基本形式。DHVD3(1,25二羟基维生素D3)是**症活动的天然调节剂,不仅能预防MS的发生,还可降低**的活动度,并且适当的血药浓度还可降低并发症(骨折及肌无力等)的发生。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联**吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体为多克隆DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体。检测相DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体也为多克隆DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
【每套试剂盒中内容】(96T)
材料 数量
标准品 96T(2vial)
预包被DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体的96孔板 96T(8×12)
生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体 96T (1:100)
浓缩ABC(亲和素-过氧化物酶复合物) 96T (1:100)
样品稀释液 96T×2
DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体稀释液 96T×1
ABC稀释液 96T×1
TMB显色液A 96T×1
TMB显色液B 96T×1
TMB终止液 96T×1
ELISA专用TBS洗涤液 96T×1(1:25)
【需要而未提供的试剂和器材】
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 自动洗板机。
4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5. 蒸馏水,容量瓶等
6. 干净的试管和Eppendorf管。
【注意事项】
1. 从-20℃取出的试剂盒,*好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀,避免解冻时出现的分层,否则会出现浓度不均一的现象。
2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3. 配制各种试剂时,切记混匀!
4. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
5. 建议所有标准品、样本都做双份检测。
6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活!
7. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。
【洗板方法】
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液,室温凝固2小时或4℃过夜,离心1000×g 10分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
【试剂的准备和保存】
A. 标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液,彻底溶解混匀后做倍比稀释。
稀释后的标准品在2小时内使用。
B.生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体工作液:在使用前2小时内准备。
1. 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实际配制时应多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul生物素标记DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体加DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
C.亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前1小时内准备。
1. 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实配时应多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D. TMB显色工作液的准备:在使用之前30分钟,按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。
【操作程序】
1. 确定本次检测所需的已包被DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体的酶标板孔数目。
2. 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3. 酶标板加上盖,37℃反应90分钟。
4. 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5. 将准备好的生物素DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。
7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应*长不要超过30分钟)。
10. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。
【操作程序总结】:
准备试剂,样品和标准品
加入准备好的样品和标准品,37℃反应90分钟
洗板2次,加入生物素化DHVD3(1,25二羟基维生素D3)抗体工作液,37℃反应60分钟
洗板3次,加入ABC工作液,37℃反应30分钟
洗板5次,加入TMB显色液,37℃反应
加入TMB终止液
30分钟之内读OD值
计算标本待测因子含量
【检测范围】:1000pg/ml→15.6pg/ml。
【敏感性】: <3pg/ml
【特异性】: 系统和其它因子无交叉反应。
【保存】: -20℃ [短期内(如两周)可4℃]
【有效期】: 12个月(-20℃)。
【用途】: 用于体外定量分析液体标本(通用型)。
【REFERENCES】
1. PARK C W. OH Y S.SHIN Y S Intravenous calcitriol regresses myocardial hypertrophy in hemodialysis patients with secondary hyperparathyroidism 1999.
2. MOHTAI M. YAMAMOTO T Smooth muscle cell proliferation in the rat coronary artery induced by vitamin D 1987.
3. CARTHY E P.YAMASHITA W.HSU A 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 and rat vascular smooth muscle cell growth 1989.
4. SHOJI T.NISHIZAWA Y.NISHITANI H Impaired metabolism of high density lipoprotein in uremic patients 1992.
5. LIM P S.HUNG T S.YEH C H Effects of treatment of secondary hyperparathyroidism on the lipid profile in patients on hemodialysis 1998.
6. 0SHOJI T. FUKUMOTO M. KIMOTO E Antibody to oxidized low-density lipoprotein and cardiovascular mortality in end-stage renal disease 2002.