上海索莱宝生物科技有限公司 专业生化试剂供应商,专业分子生物学试剂生产商 T4 DNA Ligase T4噬菌体DNA连接酶 说明:T4噬菌体DNA连接酶主要催化两条DNA链上相邻的5’磷 酸基和3’-羟基之间形成磷酸二酯键。它的主要用途是连接 带匹配粘端的DNA分子,或使平端的双链DNA分子互相连接 或与合成接头相连接。也可催化DNA与RNA之间以及少数 RNA之间的连接,但不能催化单链DNA之间的连接。 单位定义:0.01Weiss单位的T4 DNA连接酶可以在16℃下反应 20分钟,连接95%的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。 注意:一个Weiss单位的T4 DNA连接酶相当于核酸外切酶测定 中的0.2单位或60个粘性末端(New England Biolabs) 存储缓冲液:10mM Tris-HCl(pH7.5 25℃),50mM KCl, 1mM DTT,0.1mM EDTA和50%glycerol。 10×反应缓冲液:300mM Tris-HCl(pH7.8 25℃), 100mM MgCl2,100mM DTT,10mM ATP 质量控制: 1 活性:大于3Weiss单位/微升。 2 蓝白克隆鉴定:12Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内 切酶酶切产生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下,反应16 小时后转化到大肠杆菌JM109培养,白色菌落小于总菌落 数的2%;12 Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内切酶酶 切产生的钝性末端DNA在4℃下,反应16小时后转化到大 肠杆菌JM109培养,白色菌落小于总菌落数的5%。 3 核酸内切酶测定:20Weiss单位酶与1μg超螺旋质粒 DNA在37℃下反应16小时,DNA的电泳图谱不发生变化。 4 单链和双链DNase测定:20Weiss单位酶与50ng同位素 标记的单链或双链DNA反应16小时,单链DNA的释放量 小于2%;双链DNA的释放量小于1%。 5 RNase测定:37℃时,20Weiss单位酶与50ng 3H-RNA 保温5小时,释放量小于1%。 6 蛋白纯度:SDS PAGE 检测纯度≥90%。 储存条件:−20℃ From Promega M1801S
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