质粒超大量提取试剂盒(mega10) PD1614-01
产品简介
质粒超大量提取试剂盒(mega10)(Plasmid ezFilter Megaprep 10 Kit) 采用独特的双层膜过滤法,整个过程无需离心,可在60分钟内纯化到10-12 mg高拷贝质粒。
产品详细信息
质粒超大量提取试剂盒(mega10)(Plasmid ezFilter Megaprep 10 Kit) 可在60分钟内纯化到10-12 mg高拷贝质粒。
质粒超大量提取试剂盒(mega10)组分:
质粒超大量提取试剂盒(mega10)组分:
Catalog#
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PD1614-02
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Preps
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10
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DNA Unit
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10
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Filter Unit
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10
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Replacement Cup
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10
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Buffer A1
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2 x 530 mL
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Buffer B1
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2 x 530 mL
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Buffer C1
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3 x 450 mL
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Buffer KB
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530 mL
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RNase A (20 mg/mL)
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120 mg(4 x1.5 mL)
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Elution Buffer
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270 mL
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User Manual
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1
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保存条件:
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
注意事项:
1、质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer. 2、转化菌:若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、柱结合能力:10 mg
质粒超大量提取试剂盒(mega10)操作简明步骤:
2、加入100 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
3、加入100 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
4、加入120 mL Buffer C1,立即反转几次至出现絮状白色沉淀。涡漩震荡10 秒。充分混匀后,溶液将会变得颜色均一,如果此时溶液颜色不均一,均局部颜色过深,建议将溶液轻甩几次,以充分混合溶液,室温下静置10分钟。
5、将双层Filter unit与500 mL或1000 mL的**瓶(Corning#430518 or 430282 or equivalent) 连接,旋紧,再将此装置与真空负压装置连接。
6、先将步骤“5”中底部较澄清的裂解产物用50 mL移液管转移至双层Filter unit中,静置5分钟后打开真空装置,使负压由低到高,5分钟后增至*大(0.04 Mpa)。
7、当大部分裂解液已被过滤时,关掉真空负压装置,等候1分种,拆卸装置,移去双层Filter unit。
8、再将DNA unit杯与一个新的**的500 mL或1000 mL的**螺口标准瓶连接,旋紧。并将过滤嘴与真空负压装置连接。将步骤“7”中收集到的裂解液中加入120 mL 100%乙醇,立即混合均匀,立即将一半倒入DNA unit杯中,开启负压装置,进行过滤吸附操作。
9、再将剩下一半倒入DNA unit杯中,当所有裂解液已过滤完,再维持真空1分钟后,关掉负压装置。
10、在DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB,开启负压装置至*大(0.04Mpa)并维持1分钟,使Buffer KB完全通过DNA Unit杯。
11、在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇,开启负压装置至*大(0.04Mpa)并维持1分钟,使乙醇完全通过DNA Unit杯。重复此操作步骤一次。
12、在DNA Unit杯中加入80 mL100%乙醇,开启*大负压维持1分钟,关掉负压装置,倒掉瓶子中的废液,将DNA Unit杯重新连接至标准瓶上,开启负压装置至*大负压,真空抽20分钟,以充分去除残留的乙醇。
13、关掉负压装置,静置一分钟,移去标准瓶,将DNA Unit 连接至一个新的50 mL的离心管中,并旋紧。
14、加入12 mL ** ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上,室温放置2分钟,打开负压装置至*大(0.04 Mpa)洗脱DNA。此时会收集到5~6 mL洗脱液,这是1st 洗脱液。
15、关掉负压装置,将DNA Unit连接至一个新的50mL的离心管中,加入12 mL ** ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上,室温静置2分钟,开启负压装置至*大(0.04 Mpa)洗脱DNA。此时会收集到约8-10 mL洗脱液,这是2nd洗脱液。
质粒超大量提取试剂盒(mega10)操作流程: