离子对试剂

定义：

离子对 试剂是由强亲水离子形成，反作用于样品分子的中性离子对。因此，可用于同时分离带电分子和非带电分子。适用范围：一般可适用所有色谱固定相。当使用长链的离子对试剂时，如：十六烷基硫酸铵或十二烷基硫酸钠，色谱柱将选用反相色谱柱。使用浓度：离子对 试剂的适用浓度短链离子对 试剂：5×10^-3mol/L 长链离子对试剂：5×10^-4mol/L。

使用液相色谱法分析电离能力比较强的样品时，样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留，这时要加入相应的离子对 试剂，将分析物上的离子进行结合，形成在柱子上有保留的分子。就像是一个物质要穿色谱柱而过时，我们使用离子对 试剂将它留住。离子对 试剂是在高效液相色谱法中引入了离子色谱方法的一种表现。它主要是作用于样品和固定相之间的一种物质，所以在选择离子对 试剂时，要考虑色谱柱的填料和样品的酸碱性。

选择：

    离子对 试剂的种类和浓度对分离效果都有较大的影响.离子对试剂种类的选择依赖于被分离样品的性质.被分离溶质是强酸或强碱,离子对 试剂可以是强酸或强碱,弱碱或强酸,弱酸, 如被分离的溶质是弱酸或弱碱,则选用的离子对 试剂必须是强碱或强酸.对于溶质结构性质相差较大的混合样品,离子对 试剂种类的选择并没有特殊要求.离子对试 剂疏水性的差别可以通过调节离子对 试剂浓度和有机溶剂浓度获得满意的分离效果。离子对 试剂用于高压液相离子对萃取的液相色谱法分离分析强极性有机酸和有机碱的好方法。广泛应用于生物化学，**学，和石油化工等领域。

一、用于酸性化合物 1、四丁基氢氧化铵（10%水溶液） 2、四丁基溴化铵 3、十二烷基**基氯化铵

二、用于碱性化合物 1、戊烷磺酸钠 2、己烷磺酸钠 3、庚烷磺酸钠 4、辛烷磺酸钠 5、癸烷磺酸钠

离子对试剂是高效液相色谱专用试剂，主要分析测试有机碱类离子化合物，代替离子交换法，具有可靠的分离效果。也可用于分析多肽和蛋白质，是制备抗静电聚脂纤维的中间体。

选用步骤：

1. 选择一根适合的色谱柱，常为C18柱；

2.准备流动相时仅使用HPLC级别的水和色谱级试剂；

3.选择能给出*佳分离度的流动相成分和浓度；

4.如果样品中有非离子化物质，在尝试离子化分离之前首先优化分离情况；

5.选择合适的离子对系列试剂以提供相应的离子配对：对于酸性分析物使用酸性离子对试剂；对于碱性分析物使用碱性离子对试剂；

6.通过比较选择所得分离度*好的离子对 试剂；

7.一旦离子对试剂已经确定，调节流动相的pH值将分离度*大化；因为微小的pH值改变对保留性质和选择性都有较大的影响，所以仔细小心的小幅度调节pH值；

8.理想状况下，流动相中的离子对 试剂浓度应为0.005M，但是稍微增加离子对 试剂可能会稍微增加保留性质并因此优化分离情况。

 优点：

    在过去，带电荷分析物的色谱分离通过离子抑制（小心调节流动相PH值以使分析物非离子化）来达到。然而，要确定离子抑制状态下的*佳流动相PH值，却往往需要额外的摸索过程。含有一个以上的可离子化成分的样品，通常是不稳定的。离子抑制的局限性导致了一种新的、更普遍适用的方法进行可离子化物质色谱分离的方法：离子对色谱。

离子对色谱由Gordon Schill博士于1973年建立，其方法是将离子性化合物添加到流动相中以促使离子与带电荷分析物形成配对离子。这些试剂由带有可离子化终端的烷基链组 成。当在反相条件下用于常见的憎水性HPLC固定相时，离子对试剂可选择性的增加带电荷分析物的保留时间。

尽管离子交换色谱已经成为常见的分离模式，它并非在所有情况下都起作用。较离子交换色谱，离子对色谱的优点在于：1.缓冲液制备简单；2.碳链长度选择众多，可用于增加保留时间、改善分离性质；3.显著缩短分离时间；4.同时分离离子化和非离子化分析物；5.有效改善峰形。

缺点：

1.对色谱柱伤害较大。离子对 试剂会对色谱柱造成不可逆的伤害，离子对 试剂和固定相结合产生不可逆吸附，进而影响固定相活性位点。比如十八烷基硅胶键合色谱柱，离子对 试剂会影响色谱柱键合，从而达到分析样品的作用。这种反应对色谱柱影响很大，而且离子对 试剂很难从色谱柱上冲洗干净，会大大缩短色谱柱的使用寿命。

2.实验条件不稳定。离子对 试剂的浓度与其样品的保留时间有直接的影响，而且离子对 试剂对pH值比较敏感，配制流动相时要求**度较高。否则直接影响实验的重复性和重现性。

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