Hygromycin B 潮霉素B Roche 1g(20ml)
产品简介
Hygromycin B 潮霉素B Roche 潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类***,通过抑制蛋白质合成而杀死**、**和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
产品详细信息
Hygromycin B 潮霉素B Roche
作用机制:
作用机制:
潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类***,通过抑制蛋白质合成而杀死**、**和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
抗性基因:
对潮霉素B的抗性源自编码潮霉素B磷酸转移酶(Hph)的基因。至今发现两种来源:
► Streptomyces hygroscopicus产生的Hph抗性基因;
► Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae内质粒携带的Hph抗性基因(常用);
生物应用:
1) 筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞);
2) 由于作用模式的差异,常与G418 (GeneticinTM),Zeocin™和blasticidin S联合使用,筛选稳定转染两个不同载体的细胞株;
双抗性稳定转染细胞筛选的***作用机制及抗性
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***
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抗性机制
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抗性基因
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哺乳动物筛选浓度
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潮霉素B
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干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读
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Hph
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200~500μg/mL
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G418
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干扰80S核糖体功能和抑制蛋白合成
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Tn5/Tn601
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100~1000μg/mL
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Zeocin
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掺入或者切割DNA引起细胞死亡
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Sh ble
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50~100μg/mL
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blasticidin S
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核糖体上抑制肽键形成
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Bsd/BSD
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3~50μg/mL
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3)抗病毒剂,由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,而且具有抑制翻译的功效;
4)作为驱虫药加入动物饲料;
应用浓度:
Hygromycin B 潮霉素B Roche
用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 μg/mL,*佳浓度需要杀灭曲线来确定。
用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 μg/mL,*佳浓度需要杀灭曲线来确定。
哺乳动物细胞·200-500 μg/mL;**/植物细胞·100-300 μg/mL;**·300-1000μg/mL;
产品使用:Hygromycin B 潮霉素B Roche
使用一:杀灭曲线确定*佳杀死浓度(仅作参考,因个人检测体系而异)
(1)往组织培养级的96孔板内加入未转染细胞,细胞密度约50-200细胞/孔;细胞贴壁之后,往每孔加入含不同浓度(如50-1000μg/mL,至少5个浓度)潮霉素B的200μL新鲜培养基;
(2)37℃,5% CO2培养箱孵育细胞10-14天;
(3)培养5-7天后更换新的培养液,培养液内含有相应浓度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用细胞增殖方法如MTT,CCK-8等评估细胞活力;也可以通过检测细胞克隆数或百分比汇合率来确定毒性效应。一般选择在10-14天能够杀死所有细胞的*小浓度为*佳筛选浓度。
使用二:筛选稳定转染细胞
(1) 对于贴壁细胞,直接吸去60mm培养皿内的转染细胞培养基,然后加入含有潮霉素B的新鲜培养基5-6ml;对于悬浮细胞,无菌条件250x g,离心10min除去旧的转染细胞培养基,然后悬浮在约5ml的含潮霉素B的新鲜培养基;
(2) 5-7天后,如上方法更换含有潮霉素B的新鲜培养基;
(3) 再孵育细胞5-7天;
(4) 10-14天孵育后,培养体系中只含有能够表达潮霉素B抗性表型的活细胞。因此筛选之后如步骤一,更换不含潮霉素B的新鲜培养基。
Hygromycin B 潮霉素B Roche
应用实例:
Hygromycin B 潮霉素B Roche
应用实例:
物种
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细胞系/株
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质粒/载体
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筛选浓度
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E.Coli
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HB101/XL1-Blue/K802
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pEX-2
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95~950 μM
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Rice
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Protoplast
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pTRA132/pTRA141
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95~285 μM
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Barley
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Callus
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binary vector
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50 μg/mL
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Aspergillus nidulans
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G191/pDJB3-1
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pDH25
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250 ,>1000
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Chicken
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B cell line DT40
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N/A
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1500 μg/mL
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Human
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HEK293
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pUHD10-3
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50 μg/mL
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Mouse
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J1 ES
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pBS524
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200 μg/mL
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Human
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HMEC-1
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pCEP-4
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200 μg/mL
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Drosophila
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S2
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pAc, pCoHygro
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500 μg/mL
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保存方法:溶液直接存放在2℃~8℃,至少存放1年。