高效液相色谱仪应用

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例1.稠环芳烃分析(环境气体分析)

样 品:含六苯并苯等8种稠环芳烃的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:UV紫外检测器,340nm

色谱柱:C18键合相(ODS-224),5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:甲醇-二氯甲烷(8:2)混合溶剂

流 速:1mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在25min之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:六苯并苯,二苯二萘嵌苯,三苯二萘嵌苯,苯萘并二萘嵌苯,四苯二萘嵌苯,萘六苯并苯,二苯萘并二萘嵌苯,苯菲并五苯。

例2.磺胺分析(**分析)

样 品:磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,740色谱数据处理机

检测器:UV 481型紫外检测器,波长240nm

色谱柱:μ-Bondapak C18 , 5μm,柱长25 cm,柱径4.6 mm

流动相:由KH2PO4(0.05mol/L)和Na2HPO4(0.05 mol/L)以及MeOH所组成,其用量比例为200:10:165,

流 速:1mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分在6min之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:磺胺保留时间为2.60 min, 磺胺嘧啶保留时间为3.18 min、磺胺甲基异噁唑保留时间为4.33 min,甲氧苄氨嘧啶保留时间为5.19min。

例3.银杏内酯分析(**分析)

样 品:含银杏苦内酯等4种物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪

配有570自动进样器,Rheadyane 77251进样阀,HP化学工作站

检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为91℃,氮气流速为2.75L/min

色谱柱:Platinum OPS,5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:水:甲醇:四氢呋喃 = 75:20:10

流 速:1mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分在15min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为银杏苦内酯C, 峰2为白果内酯, 峰3银杏苦内酯A, 峰4为银杏苦内酯B。

例4.脂肪酸甲酯分析(**分析)

样 品:含5种脂肪酸甲酯的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为45℃,氮气流速为1.5L/min

色谱柱:Silver Impregnated Ion-Exchange ,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:乙腈:甲醇 = 2:98

流 速:0.75mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分在10min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为C18:0脂肪酸甲酯,峰为C18:1脂肪酸甲酯,峰3为C18:2脂肪酸甲酯,峰4为C18:3脂肪酸甲酯,峰1为C20:4脂肪酸甲酯。

例5.茶碱分析(茶叶)

样 品:含茶碱等三种物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:UV紫外检测器,280nm

色谱柱:Micro μBondapak C18 ,8μm,柱长25 cm,柱径4.6 mm

流动相:二甲基二酰胺:甲醇:醋酸:水 = 23.5:1:0.5:75(v/v)

流 速:1mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分8min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为可可碱,峰2为茶碱,峰3为***。

例6.脂肪酸直接分析

样 品:未经衍生处理的亚麻酸等6组分的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站

检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为65℃,氮气流速为2.0L/min

色谱柱:AlltimaTM C18 ,5μm,柱长25cm,柱径2.1mm

流动相:A为水,B为乙腈

梯 度 时间 0min 10min 15min 20min

A 13% 20% 20% 5%

B 77% 80% 80% 95%

流 速:0.4mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分20min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为亚麻酸,峰2为肉豆蔻酸,峰3为亚油酸,峰4为棕榈酸,峰5为油酸,峰6为硬脂酸。

例7:氨基酸衍生物分析(食品分析)

样 品:22种氨基酸的苯基乙酰硫脲混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,梯度洗脱装置,色谱工作站

检测器:UV紫外检测器,波长254nm

色谱柱:柱长25cm,柱径0.46cm Zorbax ODS柱(Dupont)

流动相:A液为0.01mol/L的NaAc, pH =4.5

B液为CH3CN

梯 度:0min~6min B/A = 24/76~42/58(v/v)

6min~14min B/A = 42/58(v/v)

14min~20min B/A = 24/76(v/v)

流 速:1mL/min

进 样:自动进样器进样10μL

结 果:所有组分在20min之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:峰1为ASP,峰2为GLU,峰3为ASN,峰4为SER,峰5为GLN,峰6为THR,峰7为GLY,峰8为MET·SO2 ,峰9为HYP, 峰10为ALA,峰11为TYR,峰12为HIS,峰13为CYS(CH2),峰14为VAL,峰15为MET,峰16为PRO,峰17为TRP,峰18为LYS,峰19为PHE,峰20为ILE,峰21为LEU,峰22为ARG。

例8.氨基酸直接分析

样 品:12种未衍生氨基酸混合物溶液(1mMol/L)

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵

配有二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器和化学工作站

检测器:500型ELSD蒸发光散射检测器

漂移管温度为95℃,氮气流速2.5L/min

色谱柱:Alltima C18 , 5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:A为含0.1% TFA的水

B为含0.1% TFA的乙腈

梯 度: 时间 0min 5min 20min

A液 100% 100% 60%

B液 0% 0% 40%

流 速:0.6mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在25min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为丝氨酸,峰2为赖氨酸,峰3为谷氨酸,峰4为精氨酸,峰5为脯氨酸,峰6为缬氨酸,峰7为甲硫氨酸,峰8为酪氨酸,峰9为异亮氨酸,峰10为亮氨酸,峰11为苯丙氨酸,峰12为组氨酸。

例9.糖类分析(食品分析)

样 品:含果糖等6种糖类物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站

检测器:Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为100℃,氮气流速为2.2L/min。

色谱柱:Absorbosphere, NH2 ,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:A为乙腈,B为水

梯 度:时间 0min 20min

A 85% 75%

B 15% 25%

流 速:1.5mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在24min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序依次为:峰1为果糖,峰2为葡萄糖,峰3为蔗糖,峰4为麦芽糖,峰5为乳糖,峰6为棉籽糖。

例10.嘌呤分析(**分析)

样 品:取1mL血浆加入200μL的1.98mol/L的高氯酸(GR),再加入600μL蒸馏水和200μL的1.47mol/L的别嘌呤醇(内标),用旋转混合器振摇10s于1200g离心10min,取上层清液备分析用。

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:UV紫外检测器,254nm

色谱柱:μBondapsk C18 ,10μm,柱长30cm,柱径3.9mm

流动相:0.02mol/L的磷酸二氢钾,pH = 2.2

流 速:2.0mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分在12min之内全部流出,各组分分离完全,保留时间依次为:尿嘌呤为3.18min(峰1),腺嘌呤为3.21 min(峰2),次黄嘌呤为3.90 min(峰3),5-羟基吡嗪酸为4.75min(峰4),5-羟基吡嗪胺为5.31 min(峰5),黄嘌呤为5.90 min(峰6),吡嗪酸为7.35min(峰7),内标别嘌呤醇为8.53min(峰8),吡嗪胺为9.57min(峰9)。

例11.植物甾醇分析(生物制药)

样 品:含β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇和胆固醇的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:Alltech 2000型 ELSD蒸发光散射检测器

漂移管温度为70℃,氮气流速1.6L/min

色谱柱:Supecol Discouery C18 , 5μm,柱长25cm ,柱径4.6mm

流动相:甲醇

流 速:1mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分在19min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为菜籽甾醇保留时间13.70min,峰2为胆固醇保留时间14.62 min,峰3为豆甾醇保留时间15.45min,峰4为菜油甾醇保留时间15.97min,峰5为β-谷甾醇保留时间17.05min。

例12.甾族化合物分析

样 品:含孕酮等4种物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站

检测器:Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为135℃,氮气流速为1.2L/min。

色谱柱:Hyperil C18 ,5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:甲醇:水 = 70:30

流 速:1.2mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在12min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为氢化可的松,峰2 为强的松,峰3为睾酮,峰4为孕酮。

例13.皮质醇分析

样 品:含皮质醇等5种物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:荧光检测器,流动池30μL

激发波长370nm ,检测波长480nm,狭缝均为20nm

色谱柱:Finepak C18 ,10μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:甲醇:水 = 50:100(v/v)

流 速:0.8 mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分70min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为皮质醇保留时间15.8min,峰2为β-Methasone保留时间20.0min,峰3为四氢皮质酮保留时间22.5min,峰4为四反皮质醇保留时间32.5 min,峰5为四氢-11-脱氧皮质醇保留时间65.8min。

例14.胆固醇分析

样 品:含胆固醇等6组分的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:ELSD美国Alltech MKⅢ蒸发激光散射检测器

漂移管温度为65℃,氮气流速为2.0L/min。

色谱柱:Allsphere Silica ,3μm,柱长10cm,柱径4.6mm

流动相:A为离子对试剂,B为正己烷,C为水

梯 度:时间 0min 7min 15min

A 58% 52% 52%

B 40% 40% 40%

C 2% 8% 8%

流 速:1.25mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在13min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为胆固醇,峰2为棕榈酸,峰3为磷脂酰乙醇胺,峰4为磷脂酰丝氨酸,峰5为磷脂酰胆碱,峰6为神经鞘磷脂。

例15.磷脂分析(生物)

样 品:含磷脂酰肌醇等4种物质混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站

检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为120℃,氮气流速为2.7L/min。

色谱柱:Rosil NH2 ,5μm,柱长15cm,柱径4.6mm

流动相:A为无水乙醇,B为0.2mol/L的草酸溶液

梯 度:时间 0min 15min 30min 30.1min 35.1min

A 95% 85% 85% 95% 95%

B 5% 15% 15% 5% 5%

流 速:1.5mL/min

进 样:10μL

结 果:所有组分在35min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为磷脂酰乙醇胺, 峰2为磷脂酰丝氨酸, 峰3为磷脂酰胆碱, 峰4为磷脂酰肌醇。

例16.多肽分析(生物)

样 品:含G-Y等3种多肽物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:ELSD美国Alltech MKⅢ蒸发激光散射检测器

漂移管温度为110℃,氮气流速为2.19L/min

色谱柱:AlltimaTM C18 ,5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:0.05%TFA水溶液:乙腈 = 65:35

流 速:0.6mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在5min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为G-Y,峰2为G-L-Y,峰3为K-D。

例17.维生素分析(食品分析)

样 品:含维生素A等5种物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有工作站

检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为70℃,氮气流速为2.0L/min

色谱柱:Adsorbosphere C18 ,5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:甲醇:乙醇 = 97:3

流 速:1mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在21 min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为维生素A,峰2为维生素D2,峰3为维生素D3,峰4为维生素E,峰5为维生素K1 。

例18.**素分析(**)

样 品:含有红霉素等5种**素的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪

配有570自动进样器,Rheadyane 77251进样阀,HP化学工作站

检测器:2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为95℃,氮气流速为2.0L/min

色谱柱:AlltimaTM C18 ,5μm,柱长15cm,柱径4.6mm

流动相:A为0.2% 五氟丙酸, B为甲醇

梯 度:时间 0min 5min

A/B 55%/45% 35%/65%

流 速:1mL/ min

进 样:10μL

结 果:所有组分在6min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为红霉素,峰2为链霉素,峰3为托布霉素,峰4为阿米卡星,峰5为新霉素。

例19.无活菌素分析(生物制药)

样 品:含无活菌素等5种物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪

配有570自动进样器,Rheadyane 77251进样阀,HP化学工作站

检测器:2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为96℃,氮气流速为2.9L/min

色谱柱:AlltimaTM C18 ,5μm,柱长25cm,柱径4.6mm

流动相:THF:水 = 60:40

流 速:1mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在20min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为无活菌素,峰2为单活菌素,峰3为二活菌素,峰4为三���菌素,峰5为四活菌素。

例20.非离子型去垢剂分析(化学化工)

样 品:3种非离子型去垢剂物质的混合物

色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站

检测器:2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为65℃,氮气流速为1.9L/min

色谱柱:Alltech EconosphereTM C18 ,5μm,柱长15cm,柱径4.6mm

流动相:甲醇:水 = 90:10

流 速:0.8mL/min

进 样:20μL

结 果:所有组分在5 min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为n-葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙,峰2为n-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖甙,峰3为n-辛葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙。