摘要：褪黑**与HN03在室温下发生硝基化反应生成褪黑**的硝基化合物，加N·H，O终止反应并用甲酸一甲酸钠缓冲液控制反应液pH3，在原点电位-0.20V(vs.SCE)，测量-0.50V处的二阶导数峰高方法检出限为lμg/L，线性范围为lμg/L～200μg/L，相对标准偏差为2.6%～8.0%，加标回收率为92.0%～ll0.0%，测定结果与高效液相色谱法进行比较，无显著性差异

关键词：示波极谱法;褪黑**;保健药品

褪黑**(英文名melatonin，化学名称为N-乙酰-5-甲氧基色胺)是一种主要由哺乳动物和人类松果体产生的吲哚类**，也有极少量存在于视网膜、副泪腺、脑及小肠等处。近年来，国内外对褪黑**的生物学功能，尤其是作为膳食补充剂的保健功能进行了广泛的研究，表明其与个体发育、**功能增强、延缓衰老等相关。因此，测定其在保健药品中的含量具有重要实际意义。褪黑**的测定方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联**法等方法，其中高效液相色谱法简便、快速、灵敏、准确，因而应用*多。作者发现褪黑**可与硝酸反应生成硝基化合物，该硝基化合物在pH3.0的甲酸-甲酸钠缓冲液中，于-0.50V(vs.SCE)产生一灵敏的二阶导数吸附波。本文根据该性质建立了保健药品中褪黑**的示波极谱测定法，将本法应用于保健药品中褪黑**的测定.并与液相色谱法进行比较。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

JP-2型示波极谱仪(成都仪器厂);甘汞电极(参比电极);铂电极(辅助电极);pHS-4C型酸度计(成都方舟科技开发公司);ID4-2型离心机(北京离心机厂);KQ-250型超声波清洗器(昆山市淀山湖检测仪器厂)。

褪黑**标准溶液：称取0.0100g褪黑**，用甲醇溶解后移入l0mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，此溶液为1.00mg/mL褪黑**标准贮备液。临用时用重蒸水稀释成2.00μg/mL的标准应用液。HNO3(GR);甲醇;1.40mol/L甲酸-0.60mol/L甲酸钠缓冲液(用5mol/L NaOH溶液调节pH至3.0)。所有试剂除注明外均为分析纯，实验用水为重蒸馏水。

1.2 实验方法

1.2.1 标准曲线的绘制 吸取0、0.05 mL、0.10mL、0.25 mL、0.50 m1、0.75 mL、1.00 mL褪黑**的标准应用液于10mL比色管中，分别补水至2.0mL，混匀，各加0.50 mL HNO，混匀，室温下放置15min后，加NH3·H20(1+1)终止反应并调节反应液pH3～7，再加1.0mL甲酸.甲酸钠缓冲液，以重蒸水定容至刻度并混匀。在示波极谱仪上，置原点电位为一0.20V，阴极化，三电极系统，二阶导数档，读取-0.50V(vs.SCE)处峰高。以褪黑**的含量(μg)为横坐标，峰高为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.2样品处理取数粒含褪黑**保健药片，碾碎混匀后，准确称取0.1g，置于l0mL具塞比色管中，加入10mL甲醇，超声震荡提取20min，然后以1500rpm离心10min，取上清液分析，测定时根据样品中褪黑**含量适当稀释后取0.50mL～2.00mL于10mL比色管中，按标准曲线的绘制步骤测定。根据样品峰高，标准曲线法定量。

2 结果与讨论

2.1 实验条件的选择

2.1.1反应温度及反应时间的选择反应温度及反应时间均会影响硝化反应程度，温度过低褪黑**不能被硝化，温度过高则褪黑**分解或硝化产物分解;反应时间过短，褪黑**硝化不完全，过长硝化产物会分解，并会导致分析时间延长。结果表明，20℃时进行硝化反应，褪黑**峰电流*大，在该温度下反应15min～20min，极谱峰电流*大且稳定，本法选用室温下反应15min。

2.1.2 HNO3用量的选择结果表明，HNO3用量在0.50mL以上时，有*高灵敏度且峰电流趋于稳定，故本法选用0.50mL HNO3进行硝化反应。

2.1.3 测定液pH对峰高的影响测定液pH不仅影响峰电位、峰高及峰形，还影响干扰物的出峰情况。硝化反应后，固定其他杀件，仅用NH3·H2O调节测定液pH0.08～10.26，按实验方法操作。结果发现，测定液pH在2.2～3.2范围内有*大、稳定的峰电流，且无干扰峰;pH>10.3时，也出峰，但灵敏度明显下降，且干扰较多，峰形不佳。故本法选用pH3.0甲酸.甲酸钠缓冲溶液控制测定液酸度。

2.1.4 缓冲溶液的用量选择固定其它条件，改变缓冲溶液用量进行试验。结果表明，缓冲溶液用量在0.3mL～1.2mL内时，峰电流*大且稳定。缓冲液过多过少均引起峰高下降。本法选用1.0mL缓冲溶液

2.1.5 其它条件的选择试用不同的碱(NaOH、NaHCO3、NH3·H2O)终止硝化反应并调节测定液pH，结果表明，