双黄连口服液—连翘苷的含量—二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液

　　应用范围： 本方法采用二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液中连翘苷含量。

　　本方法适用于由金银花,黄芩,连翘等精制而成的双黄连口服液中连翘苷的含量测定。

　　方法原理： 反相固相萃取法处理样品,再以反相高效液相色谱作定量分析;色谱条件:PRODIGYODS (150mm×4.6mm,5μm)C18柱为色谱柱,甲醇 水 冰醋酸=40 60 1为流动相,检测波长为227nm。连翘苷色谱峰与其它色谱峰分离良好。

　　试剂：

　　1. 甲醇(色谱纯)

　　2. 冰醋酸(分析纯)

　　仪器设备： 1 仪器

　　1.1 二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液

　　1.2 色谱柱

　　C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)，Sep-PakC18微柱

　　2 色谱条件

　　2.1流动相：甲醇 水 冰醋酸=40 60 1

　　2.3柱温：35℃

　　2.4流速：1.0mL/min

　　2.5检测波长：227nm

　　试样制备：

　  1.标准溶液的制备

　　取连翘苷对照品5mg,精密称定,加40%甲醇溶液溶解并稀释至25mL,为0.2mg·mL-1的对照品溶液,再分别吸取上述溶液适量,各加40%甲醇溶液稀释为含连翘苷0.1,0.04,0.02,0.01,0.005mg·mL-1的对照品标准溶液。

　　2. 供试品溶液的制备

　　取样品溶液(0009031)5mL,置50mL容量瓶中,加甲醇20mL,摇匀,用水稀释至刻度,为供试品溶液。取上述溶液,过Sep-PakC18微柱(先以甲醇10mL过柱活化,再以水10mL洗涤,然后加几管空气挤干,备用),流速为3～5(mL·min-1),以2(mL/管)收集流出液,共收集11管。分别吸取上述对照品溶液20μL,注入色谱仪,以流出体积为横坐标,吸收峰面积为纵坐标作流出曲线,在第5管即第10mL处连翘苷流出已达平衡。取样品溶液5mL,按过微柱,收集第14～16mL流出液,即得。

　　操作步骤：

　　1.标准曲线的绘制

　　分别吸取对照品溶液20μL,注入色谱仪中测定,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标作回归曲线。

　　2. 二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液供试品的测定

　　取样品溶液4批,分别制成供试品溶液,依法测定连翘苷含量。