Abcam抗体之一抗与二抗的选购

如何选择正确的二抗？

以下指南将帮助您选择*适合该应用的二抗。

常见问题
1. 一抗的宿主物种是什么？

二抗指向一抗的物种。如果使用来源于兔的一抗，则需要来源于除兔以外的其它物种的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG - H&L (HRP) 二抗 (ab6721) 可以检测兔多克隆抗 Ki67 一抗 (ab15580)。

2. 需要了解哪些有关一抗同型的内容？

二抗必须指向一抗同型。
多克隆一抗通常来源于兔、山羊、绵羊或驴，并且是IgG 同型。二抗通常为抗 IgG 重链和轻链的抗体。
单克隆一抗通常来源于小鼠、兔和大鼠。例如，如果单克隆一抗为小鼠 IgG1，则需要抗小鼠 IgG 或特异性较低的 F(ab) 片段抗小鼠 IgG。
人**球蛋白类、亚类、型和亚型：
类或同型：IgG (γ heavy chains), IgM (μ), IgA (α), IgE (ε), IgD (δ)
亚类： IgG1 (γ1 heavy chains), IgG2 (γ2), IgG3 (γ3), IgG4 (γ4); IgA1 (α1), IgA2 (α2)
型：κ light chain, λ light chain
亚型： λ1, λ2, λ3, λ4

其它类型的反应：
多价抗体与所有**球蛋白类反应
抗 Fc 或重链 (α, δ, ε, γ, and μ) 抗体仅与重链反应
抗 F(ab) 或完整分子抗体与重链和轻链反应，而与**球蛋白类无关
由于所有**球蛋白类均使用相同的 κ 和 λ 轻链，因此抗轻链（κ 和 λ）抗体与所有**球蛋白类反应

3. 需要酶学或荧光检测吗？

偶联类型是依赖于应用的。
对于酶学和生物素检测，例如，在 WB 或 ELISA 中，建议将二抗偶联于 HRP, AP 或生物素。不论抗体宿主物种是什麽，抗生物素蛋白和链霉亲和素与生物素的结合作用均很强，并且均能使信号放大。
如果使用了激光，例如，在流式细胞术、ICC/IF 或 IHC 中使用时，则建议将二抗偶联于荧光染料进行荧光检测。

4. 是否需要预吸附的二抗？

对于富含**球蛋白的组织和细胞，通常推荐使用预吸附血清的二抗于蛋白质印迹应用。预吸附的二抗与内源**球蛋白发生相互作用的可能性较低，因此可降低非特异性背景。二抗进行预吸附时，预吸附样品应来源于与检测样品相同的物种。例如，在人组织中检测时，将需要人预吸附抗体。

5. 是否需要亲和纯化的抗体或 I****段？

使用亲和纯化的抗体或 I****段的优点将取决于预期的结合类型。亲和纯化的抗体的非特异性结合量*低，而 I****段包含高亲和抗体。事实上，在亲和纯化中，高亲和力抗体保持固定在基质上并且不能被洗脱。

6.有必要使用 F(ab) 或 F(ab')2片段抗体吗？

F(ab) ) 和 F(ab')2片段抗体消除了抗体 Fc 部分与细胞（如巨噬细胞、树突细胞、中性粒细胞、NK 细胞和 B 细胞）上 Fc 受体之间的非特异性结合，并且由于它们尺寸较小而能够更有效地渗透组织。由于片段抗体不具有 Fc 部分，因此它们不干扰抗 Fc 介导的抗体检测。

7. 是否需要抗 IgG 重链和轻链、抗轻链或抗 F(ab')2 二抗？

我们以不同形式提供二抗：