【养HL60细胞经验 ，分条表述】

• 1.细胞形态观察。细胞膜是每天必须观察的，看是否清晰，HL60细胞的死亡往往是从细胞膜的破裂开始的，早期的表现就是细胞膜某一点出现欠完整或者毛发影。
• 2.HL60细胞往往会有“抱团”现象，抱团生长或死亡，个人认为应该勤换液或传代，尽量避免细胞抱团。
• 3.HL60细胞生长迅速，强烈建议用较大的培养瓶养，用小瓶养的话，换液不及时，很容易死亡。HL60细胞的生长速度一般为2天左右就需要传代，并且一般为一传三，或一传四。
• 4.培养液：1640培养液，1L一般加碳酸氢钠2g，并加双抗，胎牛血清浓度*佳为12%，*低不低于10%，HL60细胞对胎牛血清高度依赖。培养液PH应调为7.20-7.40之间。
• 5.防污染。HL60细胞生长迅速，较少发生污染，但常规措施应该做好。比如无菌操作，酒精**等，培养瓶口建议过火，包括瓶盖，应过火4秒左右。
• 6.冻存。-20一小时，-80过夜，液氮长期保存。强烈建议液氮长期保存，尽量不要在-80长期保存，死亡率很高。
• 7.复苏。调节水浴箱温度为42℃，并提前在试管内放置10倍培养液，使培养液温度与室温一致。1分钟内融化细胞(禁止摇晃冻存管)，移取至试管内，动作要轻，从试管管底开始慢慢上提移液管，使细胞在培养液内分布均匀，离心，洗2次。

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