细胞培养的基本方法
动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外对细胞进行培养，使之生存和生长的一种技术手段。
1.组织、细胞的解离方法
1.1 解离组织：在无菌情况下采取动物的组织或器官，放在含有***的平衡盐溶液(BSS)中，然后尽快在超净台或无菌室内进行解离处理。
解离时应注意:
1) 尽可能将脂肪和坏死组织去除干净；
2) 剪碎组织时，避免损伤组织块；
3) 解离组织用的各种酶系，需要先进行低速离心。
解离细胞
常用酶和鳌合剂进行解离：
当实验室需要制备具有均匀细胞层的培养物；
从单个细胞出发获得细胞群体；
从一定量的组织中获得*多的细胞量时。
解离细胞的方法
1）胰蛋白酶解离细胞法：所需时间较短，主要缺点是破损细胞。
2）胶原酶解离细胞法：这种方法对解离胚胎性、正常和恶性组织是很有效的。胶原酶*终浓度200u/ml，36.5℃温育，一般温育4-48h。胶原酶和透明质酸酶协同作用有助于分离大鼠或兔的肝脏组织。
3）机械解离细胞法：比酶法所需时间短，但细胞存活率较低。
4）螯合剂解离细胞法：分离效果差
原代细胞培养
1）外植块培养：外植块在一定限度内可保持其原有组织结构，有利于其适应体外培养环境。短期培养的外植块成为细胞培养的材料来源之一。
2）单层细胞培养：每隔1~3d换液一次，细胞长成单层后传代培养。
3）悬浮细胞培养：使细胞成悬浮状态在培养液中连续生长。
由于细胞本身是不粘附的，如小鼠白血病细胞和腹水肿瘤细胞；
通过机械搅动使细胞保持悬浮状态；
通过选择培养得到能悬浮生长的细胞进行悬浮培养。
细胞培养中应注意的几个问题
1）培养液和培养物的比例：一定浓度的培养液仅能支持一定数量的细胞生长，不能盲目增加每单位体积的细胞浓度。
2）PH：初培养pH应为7.4，培养过程应不低于7.0。
3）培养瓶内的空间：一般培养瓶内培养液与液面上的空间体积之比为1:10。
4）容积、深度、表面面积：培养液体积与表面面积的比例为0.2~0.5ml/cm2。需高浓度氧的，在浅的培养液（2mm）中生长较好；需要低浓度氧的。在深的培养液（5mm）中生长较好。
5）去除死细胞
6）温度控制：动物细胞培养对温度波动的敏感性很大。温度低于36.5℃，细胞生长缓慢；温度高于37.5℃，细胞存活力降低。
动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外对细胞进行培养，使之生存和生长的一种技术手段。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
细胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。
细胞的全能性不是动物细胞培养的基础，细胞的全能性是植物细胞培养的理论基础。而动物细胞培养的理论基础是细胞增殖。动物细胞培养基本技术及理论基础 http://www.lookbio.com/threestyle/lookbio/secondcatalog/3123712/1.html
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