人抗精子抗体(AsAb)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人抗精子抗体(AsAb)酶联**分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒定性测定人血液、或其它相关组织中抗精子抗体(AsAb)
实验原理：
本试剂盒采用双抗原夹心酶联**法（ELISA）测定标本中人抗精子抗体(AsAb)。用纯化的精子抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中人抗精子抗体(AsAb)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的精子抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人抗精子抗体(AsAb)的存在与否。
试剂盒组成：
1 | 20倍浓缩洗涤液 | 50ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1/瓶 | 8 | 标准品（阳性对照） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液（阴性对照） | 0.5ml×1瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求：
1．标本处理：血清、血浆标本可直接检测
2．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20℃保存一个月，但应避免反复冻融。
3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至1000ml后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为人抗精子抗体(AsAb)阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为人抗精子抗体(AsAb)阳性
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意**。
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
厦门慧嘉生物科技有限公司专业代理众多国际生命科学领域的知名品牌。致力于各种 ELISA 试剂盒 、**组化试剂盒、 一抗二抗 、细胞因子、生物试剂、移液器、耗材的销售推广及服务工作。
咨询电话：0592-6020891 18906011628 http://www.biohj.com QQ：1048735792
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