实验原理
在基因工程实验和分子生物学实验中，**是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开**。特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。*后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制**的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做**生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。实验室中*常用的是LB培养基。
实验试剂
1、胰蛋白胨
2、酵母提取物
3、氯化钠
4、1mol/L NaOH
5、琼脂粉
6、***（氨苄青霉素、卡那霉素等）
实验设备
1、培养皿
2、带帽试管
3、涂布器
4、**锅
5、无菌操作台（含酒精灯、接种环、**牙签等）
6、恒温摇床
实验材料
大肠杆菌
实验步骤
（一）LB培养基的配制
配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：
**培养用胰蛋白胨 10g
**培养用酵母提取物 5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为lL，在15 lbf／in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气**20min，即为LB液体培养基。
LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。
（二）**的培养
（１）在液体培养基中培养
1、过夜培养
⑴取5ml液体培养基加入一只无菌的试管中。
⑵用接种环或**牙签挑一个单菌落，接种于培养液中。
⑶盖好试管，在摇床上以60r/min速度，于37℃过夜培养。
２、大体积培养
⑴按1∶100的比例将过夜培养物加入到一无菌烧瓶中，烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。
⑵于37℃，约300r/min剧烈摇动培养。
（２）在固体培养基中培养
**在固体培养基上培养主要是为了获得单菌落和短期保存。
**在固体培养基上培养主要是为了获得单菌落和短期保存。
平板划线法分离单菌落
⑴采用无菌技术，用接种环将接种物从平板的一侧开始划线。
⑵重新**接种环，从**划线处将样品划线至平板的其余部分，重复划线直至覆盖整个平板。
⑶于37℃培养直至长出单菌落。
——**的培养
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