TUNEL
一、材料：原位细胞凋亡检测试剂盒（美国ROCHE公司出品）、
DAB检测试剂盒
二、操作程序
①石蜡包埋的切片的预处理常规脱蜡脱水
②用蛋白酶K（20μg/ml溶于Tris/HCl中，Ph7.4~8.0）室温孵育15~30分钟。37度孵育15分钟。PBS洗2次
③标记：PBS冲洗2次，擦干样品周围的水，滴加50ul的TUNEL反应混合溶液，在湿盒中37℃孵育60分钟（为防止蒸发和保证TUNEL 反应混合物均匀分布，在孵育过程中加盖盖玻片）。PBS冲洗3次，至此样品可在荧光镜下分析结果。
④信号转化和分析：擦干样品周围的水分，加入50ul转化剂-POD，在湿盒中37℃孵育30分钟（为防止蒸发和保证转化剂-POD均匀分布，在孵育过程中加盖盖玻片）。PBS冲洗3次，加入50~100μl DAB底物溶液，室温孵育10分钟，PBS冲洗3次。
⑤苏木素复染细胞核，封片，在光镜下图象分析：选择有意义的组织相，经登录、编号、采集、分析、读取数据、*后存盘。
注：对照（条件允许或自认为有必要的情况下）：
阴性对照：经过固定和通透的细胞样品加入50μl试剂2以代替TUNEL反应混合物，从标记步骤以下同上。
阳性对照：经过固定和通透的细胞样品用**的核酸酶或DNase I使之产生DNA链缺口，从标记步骤以下同上。
仪器设备
一、显微镜：日本奥林巴斯 BX51T-PHD-J11
二、CMOS:日本奥林巴斯
三、多功能真彩色细胞图象分析管理系统：美国Media Cybernetics 公司Image-Pro Plus
四、切片机：德国莱卡RM2015
五、离心机：北京离心机厂LDZ5-2型
六、电子天平：瑞士METTER AE100型
七、移液器：德国EPPENDORF
八、干燥箱：日本三洋MIR-153型
九、低温冰箱：日本三洋MDF-382E型
十、恒温水浴箱：江苏太仓医用仪器厂DSHZ-300型
十一、医用微波炉：浙江临安爱迪仪器厂YWY781B型
公安机关备案号：
