分光光度计采用1个可以产生多个波长的光源，经过系列分光装置，因此产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收。
分光光度计计算样品的吸光值，因此转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。