PCR基因扩增仪故障维修/维护/使用

PCR基因扩增仪故障维修/维护/使用
近几年，谈起PCR仪器，“核酸检测中的功臣”这个称谓非它莫属了。

自1971年发明以来，PCR技术不断的发展，PCR的使用从测序和分子克隆，逐渐应用于病毒、**、 **和物种的鉴别和鉴定。

PCR高灵敏性、快速和高通量的特点，深得实验室的青睐，已在医学、微生物学、植物学和动物学等领域得到广泛的应用与推广。

不过，作为实验室的“老员工”，也会遇到各种故障问题。有不少老师反映在PCR的使用过程中，遇到了屏幕不亮、加热或冷却速度缓慢、扩增曲线异常，仪器无法正常使用等问题。 



案例一：PCR仪升降温速度缓慢，降温速率超过标定的速率20%。

这种情况可检查制冷散热部分，是否被遮挡或有灰尘要清理。如无法解决应为硬件故障，需要找专业人士处理哦~



案例二：屏幕不显示，马达和风扇不启动。

遇到这种情况，可能是总保险丝被熔断导致的，需更换保险丝。先将PCR仪关机，拔去插头，打开电源插口旁边的保险盒，换上备用的保险丝，观察是否恢复正常。



案例三：PCR结果的扩增曲线出现折线

如多次试验都是扩增曲线出现折线，可能是光源卤素灯老化导致的，更换卤素灯后若故障仍然存在，可测量一下卤素灯供电电压，如果电压出现时有时无的现象，检查下开关电源的芯片。若是芯片的原因，更换芯片后，卤素灯供电电压会恢复正常，仪器可正常使用。

  

案例四：个别孔的数据出现异常

可能是样品池被污染了，需清洗被污染的孔。方法如下：用移液器吸取少量水或乙醇并滴入每个污染的反应孔中吹打数次，随后将废液吸入废液杯中。若未能有效**污染物，重复以上步骤（乙醇三次，去离子水三次）



除此之外，在日常的维修维护过程中，我们的工程师也总结了其他的一些常见问题，如热盖损坏、加热模块故障、电路短路、制冷半导体等问题。一起看看你是否也遇到了这些问题~又是如何解决的呢？





01 故障问题



“热盖问题



PCR仪的热盖大致可以分为以下四种：非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖。

在PCR实验中，可通过加热盖的办法来防止试剂蒸汽的凝结，热盖温度一般比反应液的温度高，以防止蒸汽凝结。

可调节式热盖利用手拧压紧式，拧不紧会发生试剂蒸发，通过增加热盖压力可以尽量减少边缘蒸发的现象。有时拧得过紧反而可能出现压坏管子、拧坏旋钮的情况。

通常，采用电动智能热盖，能够自动感应不同高度的耗材，自动压紧耗材，压力均匀且恒定，从而能够减少试剂蒸发和人工误差。

不过，热盖被损坏的情况也时常发生。若发现试剂蒸发的现象，需对热盖进项检查。

加热板需要放平并按紧（96孔四角平衡）；关盖子需慢慢按压，力度太大容易压坏 。





制冷半导体故障



PCR仪用的制冷半导体是PCR仪专用的半导体片，能承受相对较大的温度变化，但由于是半手工制品，也存在一定的故障风险。此外，PCR仪器耐受的温变化次数也与其材料及生产技术有关。



制冷片保持低温（如4度）时，冷面会凝集水，这样会导致制冷片故障的发生，所以，不需要4度过夜的尽量不要4度过夜。此外，制冷片及其周围环境的防水也至关重要，如果防水做得不好，制冷半导体进水，其寿命会大大减少。





“控制板故障



控制板是PCR仪的指挥中心，在受到外部因素影响时，容易出现故障问题。如灰尘过多引起控制板温度过高、湿度过大引起电路短路、串扰（从电源线来）及电磁幅射（无线）的干扰等。





“加热模块故障



PCR仪温度的准确性对PCR的实验分析起着举足轻重的作用。保持加热模块上孔与孔之间的温度一致性，这对获取可靠且可重复的PCR结果也是至关重要的。 

 确保热准确性的一种方法就是经常使用温度验证试剂盒进行检测，并根据需要由接受过培训的专业人士进行重新校准。







02 日常维护



PCR仪器能否正常运行，受到很多因素的影响，如实验室环境、实验的操作顺序、仪器的卫生清洁等。在日常的维护中，更是需要从多方面着手，营造一个**、高效率的实验环境。





实验室环境

1） 电源，建议配置UPS（>1.5KVA，电池供电2小时以上）或稳压器；

2）保证通风，仪器的通风应该没有阻挡；

3）适宜的温度与湿度：实验室温度控制在20-25℃，相对湿度控制在20-80%，保持空气洁净；

4）仪器放置的空间，要易于操作且**。





电源开关 

如果主机和计算机开机使用，每周应该进行一次关闭主机电源开关，关闭计算机，然后重新打开计算机和仪器电源开关的操作；

注意正确的计算机和主机电源开关顺序，首先打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面，接着打开仪器电源开关，预热30分钟左右，随后点击SDS软件。





定期进行校正

ROI校正、背景校正、纯荧光校正等特指某特定品牌的荧光定量PCR仪器需要做相关校正。(一般是ABI的荧光定量PCR仪 如 7500 Q5\Q6\Q7等)



ROI校正：目的是校正每一个反应孔内的荧光强度,和每个荧光孔的位置，建议每半年执行一次目标区（RIO）校正；

如果怀疑仪器光路受到影响，如仪器搬动，建议进行目标区（RIO）校正；在执行目标区（RIO）校正时，使用目标区（RIO）校正板。



背景校正：是为了校正各通道是否有背景荧光存在，建议每月执行一次背景校正；执行背景校正时，使用背景校正板。



纯荧光校正：是为了校正各荧光通道是否均一，是否存在污染，建议每半年执行一次纯荧光校正；如果使用自定义的荧光，必须进行纯荧光校正；执行纯荧光校正时，使用纯荧光校正板。





更换卤素灯 

建议每半年检查一次灯具状态。比如，在7500 Software中，可选择Instrument-Lamp Status/Replacement 确定卤素灯的状态。Condition 显示Good表示灯具工作良好，不需要更换卤素灯；显示Failed表示卤素灯已坏，需更换；Change Soom表示灯具使用超过2000小时，建议更换。





日常清洗卫生



1、主机表面清洗

1）使用无绒布块蘸取75%酒精清洁仪器的表面，此外，还需清理放置仪器的桌面，以免桌面积灰或杂物堵住通风口；

2）检查仪器进风口、出风口是否通畅，若通风口被灰尘或杂物堵塞易造成散热不好，从而影响仪器升降温速度和温控精准度；

3）使用75%酒精浸泡反应管托架，晾干后放回仪器内。





2、样品槽清洗

1）关闭电源，冷却15分钟；

2）打开扩增仪抽屉，向污染孔加入微量去离子水，吸出去离子水并用棉签擦拭壁，用不脱毛布块吸出剩余的离子水；

3）执行背景校准，以确认是否**污染物。若污染物依然存在，用95%乙醇溶液清洗；

4）若污染物依然存在，用10%漂白剂溶液清洗；

5）用乙醇或漂白剂溶液清洗后，一定要用去离子水冲洗一遍。





3、热盖清洗

对于荧光定量PCR仪，当有荧光污染出现，而且这一污染并非来自样品池时，或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时，需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面，确保样品池的孔干净，无污物阻挡光路。





03 注意事项



PCR在日常的使用过程中，也有一些事项需要注意，平时做好维护，就会减少一些故障问题的发生哟！不过，若涉及到一些专业性的维修维护工作，还是需要请相关工程师来解决哦~



一起来看看，在PCR的使用中，你是否注意到这些事情了呢？



1）PCR仪应定期运行维护，长期不用，建议至少每隔半月开机自检20min左右；

2）严禁工作时打开机盖；机盖开关要轻，以防损坏盖锁；

3）工作环境温度建议在18-35℃之间；

4）样品池、热盖定期清洁，建议半年或个别孔出现污染时进行；

5）实验前建议预热30min，同时应避免PCR仪过夜控温；

6）PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的，当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1-2℃时，可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差；

7）一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时，不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件，必要时要请专业人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修；

8）若发现仪器降温速度比正常状态的慢、仪器发烫，或者温度下降达不到设定的温度，可检查进风口和出风口是否有异物堵塞。