大鼠True insulin定量EIA试剂盒使用说明书

大鼠True insulin定量EIA试剂盒使用说明

原理

本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗大鼠True insulin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 True insulin与单抗结合，加入酶标抗体，形成**复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，True insulin浓度与OD值成正比，可通过��制标准曲线求出标本中True insulin浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）

准备试剂与收集血样

1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。
2. 标准品浓度分别为14、8、3.2、1.6、0.8 ng/ml。
3. 标本如果需要稀释可以用蒸馏水稀释。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 建立标准曲线：设标准孔6孔，每孔各加入标准品50ul（空白除外）。
2. 加样：待测品孔每孔各加入待测样品50ul。
3. 每孔加酶标抗体工作液50ul（空白除外）。将反应板置37℃120分钟。(室温过夜可以提高灵敏度)
4. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
6. 每孔加入100ul终止液混匀。
7. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算。如空白OD低于0.1，也可以直接计算。
2. 以标准品14、8、3.2、1.6、0.8、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，使用软件作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值计算出相应True insulin含量。软件可以向本公司邮件索取。

试剂盒性能

            1. 灵敏度：*小的True insulin 检测浓度小于0.4ng/ml。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠True insulin。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10％。

注意事项

            1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致**度误差及OD值错误地升高。

            3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

            4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！