天麻为兰科植物天麻Gastrodia elataB1.的干燥块茎。多年来其质量主要以指标成分天麻素等酚性成分的含量测定来加以控制,因此很难**评定药材的真正质量。中药指纹图谱及化学模式识别技术是解决中药质量评价和分类鉴别的有效手段,继前文对天麻指纹图谱的建立及相似度评价进行报道之后¨J,本研究主要讨论指纹图谱的模式识别工作。常用的模式识别方法有聚类分析、判别分析等,近年来广泛应用于中药指纹谱的数据处理工作 。作者应用聚类分析和判别分析对不同产地及不同质量等级的2O天麻药材进行了模式识别研究,以期**评价天麻药材质量。1 仪器与试药美国Waters公司2690高效液相色谱仪(包括四元梯度泵,真空脱气机,自动进样器,柱恒温系统);Waters 996二极管阵列检测器;Waters Millenni—um 32色谱工作站;Millipore超纯水;色谱纯甲醇,色谱纯醋酸。天麻对照药材(中国药品生物制品检定所,批号120944—200006),2O个天麻样品来源于不同产地,详见表1,由河南中医学院陈随清教授鉴定为兰科植物天麻。2 方法2.1 指纹图谱原始数据的获取精密称取天麻粉末8 g,加人80 mL甲醇超声提取30 min,放置过夜(约14 h)再次超声提取3Omin。将提取液过滤、浓缩,用超纯水定容至10 mL即得供试品溶液。1O L进样,液相色谱分析,270nm检测,记录75 min内的记录器上出现的一个个曲线称为色谱峰。>色谱峰及其保留时间和基线构成之面积称峰面积>峰面积。色谱条件:Hypersil C 色谱柱(4.6 mm×
表1 不同来源天麻样品样品号 药材产地安徽(同仁堂药房,放置1年以上)海王星辰民政店(产地不祥)海王星辰西安路店(产地不详)四川(成都中医药大学提供,放置1年以上)安徽(戚运生药店)安徽(海王星辰西安路店)安徽(海王星辰民政店)云南昭通二级家种云南昭通**家种云南昭通野生**野生云南昭通特级野生陕西(郑州本草国药馆)陕西(安国药材市场)四川半野生四川半野生河南伏牛山河南大别山陕西秦岭山区河南(禹州药材市场)安徽(对照药材)250 mm,5 Ixm,大连依利特公司);流动相0.5%醋酸甲醇(A)-().5% 醋酸水溶液(B),0~10 min 2%A。1O~60 min 2% ~40%A,60~75 min 40%A;柱温35 ;流速1 mL·min~。2.2 数据处理峰匹配后,选择27个指纹峰作为模式识别的变量(图1),已知成分的峰归属主要参照自制标准品。计算用峰面积值均为经过含水量折算的面积值,即每个样品的浓度均相当于每毫升0.8 g干药材。系统聚类分析、判别分析采用SPSS 10统计处理软件。其中聚类分析采用类间连接法、*近距离法、*远距离法、重心法、中间距离法和离差平方和法六种不同的定义类间距离的方法,而距离测度均选用欧氏距离平方法。判别分析采用逐步判别分析法筛选预测变量。数据分析以27个指纹峰的峰面积(原始数据分析)或经过标化后的面积(标准化数据分析)作为因
变量进行分析。标准化的具体算法为:将每个指纹峰的原始峰面积减去相应的面积均值再除以相应的方差即得,标准化变换后的数据其均值为零方差为1。
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