摘要:目的:测定5种产地丹参中丹参素、原儿茶醛的含量。方法:采用高效液相色谱法,Kromasil分析柱(250 mmx46mm,5μm;流动相:甲醇-1Og/L冰醋酸20:80;紫外检测波长:280nm;流速:1.0ml/min。结果:丹参素在4.2—33.6μg/ml,原儿茶醛在O.36—1.80μg/ml范围内线性关系良好,丹参素和原儿茶醛*低检测限分别为1O.5 ng和0.6 ng,回收率分别为99.36%(RSD为1.26%)和97.54%(RSD为O.81%)。结论:该方法简便、灵敏、准确,样品处理简便易行,在考察评价丹参药材质量上有实用价值。不同产地的丹参,其丹参素和原儿茶醛含量有一定差异。 关键词:丹参;丹参素;原儿茶醛;高效液相色谱法 丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhizaBge)的干燥根及根茎,具有祛瘀止痛、**通经、清心除烦之功效。现代中药药理学研究表明,丹参能够增加冠状动脉血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循环作用。其主要有效成分为水溶性酚性酸(丹参素和原儿茶醛)及脂溶性二萜醌类(丹参酮ⅡA)。传统和现代医学使用丹参,主要是以其水溶性成分为主的各种制剂。因此,为了临床和科研的需要,笔者用高效液相色谱法对丹参中水溶性成分丹参素和原儿茶醛进行测定,比较5种产地丹参中丹参素和原儿茶醛的含量。 1 材料 1.1仪器美国Waters公司产高效液相色谱系统(7725手动进样器,600泵,996二级管阵列检测器,M豫数据处理系统),Digital586计算机,TGL·16G台式高速离心机,Sz-93自动双重纯水蒸馏器,TN-100 B型托盘扭力天平,GB-204型电子天平。 1.2药材陕南丹参,购自陕西省药材公司;洛阳丹参,购自河南省洛阳药材站;蒲城丹参,购自陕西省蒲城药材公司;卢氏家种丹参、卢氏野生丹参,均购自河南省三门峡药材采购供应站中成药经营部。以上5种产地丹参均经中国人民解放军第四军医大学**研究所孙玲变副主任药师鉴定为唇形科植物丹参(Salviamihiorrhiza Bge)的干燥根茎。 1.3试剂甲醇,购自天津化学试剂有限公司,分析醇;冰醋酸,购自陕西省西安化学试剂厂,分析醇;丹参素钠标准品:购自中国药品生物制品检定所,编号855-200102;原儿茶醛标准品:购自中国药品生物制品检定所,编号0810-9803;水为自制双蒸水o 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱:中国科学院大连物理化学研究所KF系列HPLC柱。KromasilCl8:250 mm x4.6 mm,5μm,NO:Cl8B 021110;流动相:甲醇一1Og/L冰醋酸(20:80);流速:1.0ml/min;检测波长:280nm;检测灵敏度:0.001AUFS;柱温:18℃;分离度:1O.34;理论塔板数(以丹参素计算)为6390。 2.2线性范围精密称取丹参素和原儿茶醛对照品适量,分别用lOg/L冰醋酸配制成浓度为0.21mg/ml和0.12mg/ml的对照品母液。用微量加样器分别吸取丹参素对照品母液200,400,800,1000,1200,1600μl;原儿茶醛对照品母液3O,6O,90,105,120,150μl,以对应顺序加入lOml棕色容量瓶中,加lOg/L冰醋酸至刻度线,配制成6种不同浓度的混合对照品溶液。用微量进样器吸取5μl进样,以基线构成之面积称峰面积。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h>峰面积为纵坐标,对照品进样量(ng)为横坐标,进行线性回归(n=6)。得丹参素和原儿茶醛的回归方程为:y=-86.75+158.54x,r=0.9997;Y=16.45+1751.28x,r=0.9990。结果表明,丹参素在4.2~33.6μg/ml、原儿茶醛在0.36—1.80μg/ml范围内呈现良好的线性关系。 2.3 精密度试验精密吸取丹参素浓度为21.00μg/ml,原儿茶醛浓度为1.26μg/ml的混合对照品 溶液重复进样5次,丹参素和原儿茶醛峰面积积分值RSD分别为0.37%和0.28%(n=5)。 2.4重复性试验取同一产地药材样品(卢氏野生丹参)煎液,按样品溶液预处理方法制备5份,分别进样5μl,结果丹参素和原儿茶醛峰面积积分值RSD分别为0.38%和0.33%。 2.5 稳定性试验取同一产地供试品溶液(卢氏家种丹参)在0,2,4,6,8h分别测定,记录丹参素和原儿茶醛峰面积,结果峰面积RSD分别为1.17%和0.49%。表明供试品溶液稳定。 2.6*低检测限测定取混合对照品溶液,用l0g/L冰醋酸依次稀释制成一系列由高到低的梯度浓度溶液,在上述色谱条件下分别进样,取峰高为噪声3倍时的进样量为*低检测浓度,由进样量20μl得出*低检测限。结果丹参素和原儿茶
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