1. 范围本方法采用高效液相色谱法检测尿样中**剂类**。本方法适用于尿样中的**剂乙酰唑胺(Acetazolamide)的初筛。检测范围:为200~2000ng/mL尿。2. 原理尿中**剂类**多以原型形式存在,可以在酸性和碱性条件下直接进行萃取。基本步骤包括:分别在酸性和碱性条件下萃取,合并后吹干,定容,测定。3. 试剂和材料3.1 乙酸已酯3.2 甲醇3.3 乙腈3.4 盐酸乙胺3.5 酸性固体缓冲剂(pH约3.5)分析纯磷酸二氢钾和磷酸氢二钠按重量比99:1混合,pH约3.5。3.6 碱性固体缓冲剂(pH约9.5)分析纯碳酸氢钠和碳酸钾按重量比3:2混合,pH约9.5。3.7 Acetazolamide, Amiloride, Bendroflumethiazide, Bumetanide,Canrenone, Chlortalidone, Clopamide, Ethacrynic acid, Furosemide,Hydrochlorothiazide, Indapamide, Torasemide, Triamterene,Spironolactone, Xipamide等(美国Sigma公司产品)3.8 乙酸铅溶液,50g/L3.9 带盖的普通试管3.10 1ml小瓶3.11 铝盖(11mm)3.12 吸液尖,200μL、1mL、5mL3.13 C18反相液相色谱柱3.14 往复式振荡器3.15 旋涡混合器3.16 离心机4. 分析仪器4.1 高效液相色谱仪(二元泵),分析柱为HP18(250mm× 0.5mm × 3μm, 填料 为C18 ,粒度为5μm),二极管阵列检测器。4.2 仪器条件检测波长为210nm,230nm,275nm,流速为1ml/min,采用磷酸盐缓冲液(A)(pH =3)和乙腈(B)进行梯度洗脱,梯度为: 0 min A 85% B 15%10 min A 70% B 30%20 min A 65% B 35%5. 试样制备检测样:收集的尿样阳性尿:由成年志愿者口服(个别需静脉注射)**剂**的成品药,收集
相应时间段的尿液。 6. 操作步骤 6.1 提取 6.1.1酸性提取于5mL尿样中加入2g酸性固体缓冲剂(pH约3.5)和4mL乙酸乙酯,震荡提取20分钟后离心分离。有机相中加入2mL乙酸铅溶液(50g/L),震荡5秒后离心分离。保留有机相。6.1.2碱性提取于5mL尿样中加入2g碱性固体缓冲剂(pH约9.5)和4mL乙酸乙酯,震荡提取20分钟后离心分离。有机相与酸性提取的有机相合并,在50ºC下用氮气流吹干有机相,残渣用500μL甲醇溶解。 6.2 仪器分析 取制备好的试样于HPLC上进样10μL进行分析。 7. 检测结果 将尿样与随行的标准品的液相色谱图及紫外光谱图进行对比,如吻合即可确定该尿样为可疑,从而完成**剂的初筛。 8. 精密度 (略) 9. 参考文献 兴奋剂检测的有关规定及相关方法。
本篇文章来源于 **剂类**乙酰唑胺的检测—高效液相色谱法|科学仪器在线 原文链接:http://www.hg17.com/knowledgeview473.html