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南京固琦分析仪器制造有限公司
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色谱法概述
色谱法概述
色谱法是一种分离技术,该分离技术应用于分析化学中,就是色谱分析.它分离原理是,使混合物中各组分在两相间分配,其中一相不动,称为固定相,另一相携带混合物流过固定相的流体,称为流动相.这种借两相间分配原理使混合物各组分分离的技术叫色谱法.
各组分被分离后,可进一步进行定性和定量分析:
经典:分离过程和其含量测定过程是离线的,即不能连续进行
现代:分离过程和其含量测定过程是在线的,即能连续进行
经典色谱法:将潮湿的碳酸钙挤出玻璃管,用刀将各色带切下,用适宜的方法进行分析;
现代色谱法:当一个两组分(A和B)的混合物样品在时间t1从柱头加入,随着流动相不断加入,洗脱作用连续进行,直至A和B组分先后流出柱子而进入检测器,从而使各组分浓度转变成电信号后在荧光屏上显示出来。
根据峰的位置(出峰时间 t ) ——定性
根据峰的面积 A (或峰**) ——定量
2、 色谱法分类
(一)按两相物理状态分
1. 气相色谱法 (gas chromatography 简称 GC)用气体作流动相的色谱法。
气 -固色谱法 GSC (固定相为固体吸附剂)
气相色谱法
气-液色谱法 GLC (固定相为涂在固体或毛细管壁上的液体)
2. 液相色谱法 (liquid chromatography 简称 LC)用液体作流动相的色谱法。
液-固色谱法 LSC(固定相为固体吸附剂)
液相色谱法
液-液色谱法 LLC(固定相为涂在固体载体上的液体)
3. 超临界流体色谱法 (SFC)
用超临界状态的流体作流动相的色谱法。
超临界状态的流体不是一般的气体或流体 , 而是临界压力和临界温度以上高度压缩的气体 , 其密度比一般气体大得多而与液体相似 ,故又称为 “ 高密度气相色谱法 ”
(二)按固定相的形式
1. 柱色谱法(column chromatography ):
固定相装在柱中 , 试样沿着一个方向移动而进行分离。
包括 填充柱色谱法:固定相填充满玻璃管和金属管中
开管柱色谱法:固定相固定在细管内壁(毛细管柱色谱法)
2. 平板色谱法 (planer chromatography ):
固定相呈平面状的色谱法。
包括 纸色谱法: 以吸附水分的滤纸作固定相;
薄层色谱法:以涂敷在玻璃板上的吸附剂作固定相。
(三)按分离原理分
1. 吸附色谱法( adsorption chromatography ):
根据吸附剂表面对不同组分物理吸附能力的强弱差异进行分离的方法。
如:气一固色谱法、液-固色谱法——吸附色谱
2. 分配色谱法 (partition chromatography ):
根据不同组分在固定相中的溶解能力和在两相间分配系数的差异进行分离的方法。
如:气-液色谱法、液-液色谱法——分配色谱
3. 离子交换色谱法(ion exchange chromatography )
根据不同组分离子对固定相亲和力的差异进行分离的方法。
4. 排阻色谱法( size exclusion chromatography):
又称凝胶色谱法 (gel chromatography ),
根据不同组分的分子体积大小的差异进行分离的方法。
其中:以水溶液作流动相的称为凝胶过滤色谱法 ;以有机溶剂作流动相的称为凝胶渗透色谱法。
5. 亲合色谱法 (affinity chromatography)
利用不同组分与固定相共价键合的高专属反应进行分离的方法。
3、气相色谱介绍
主要包括五大系统
⒈载气系统:它是载气连续运行的密闭管路系统,要求是密封性好流速稳定,使用的载气纯净。一般用皂膜流量计测得柱后载气流量F。
⒉进样系统: 包括进样器和气化室。进样器是将试样快速而定量的加到色谱柱头上。液体:0.5、1、5、10、25、50 mL(一般进样0.1~10 mL);气体:0.25~5 mL 注射器或六通阀 (一般进样0.1~10mL)。气化室是使样品在汽化室汽化,并很快被带入色谱柱。
⒊分离系统: 色谱柱、柱箱和控温装置。主要是在色谱柱内完成试样的分离,有填充柱和毛细管柱两种。
填充柱 填充柱由不锈钢, 玻璃或聚四氟乙烯等材料制成,内装固定相,一般内径为2~6mm,长1~5m。填充柱的形状有U型和螺旋型二种。柱内填充固定相,制作简单,柱容量大,操作方便,分离效果足够高,n在102~103之间,应用普遍。
毛细管柱又叫空心柱,分为涂壁,多孔层和涂载体空心柱。涂壁空心柱是将固定液均匀地涂在内径0. l~0.5mm的毛细管内壁而成,毛细管材料可以是不锈钢或石英。毛细管色谱柱渗透性好,传质阻力小,而柱子可以做到长几十米。与填充柱相比,其分离效率高(理论塔板数可达106)、分析速度快、样品用量小,但柱容量低、要求检测器的灵敏度高,并且制备较难。
⒋检测系统:检测器
5记录系统:记录仪或数据处理装置。
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