维生素C是一种已糖醛基酸,有抗坏血病的作用,所以被人们称做抗坏血酸,主要为还原型及脱氢型两种,广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一,本身易被氧化,但在有些条件下又是一种抗氧化剂。
维生素C(还原型)纯品为白色无臭结晶,熔点190~192℃,溶于水或乙醇中,不溶于油剂。在水溶液中易被氧化,在碱性条件下易分解,在弱酸条件中较稳定,维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸(有生理作用)。如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸,失去生理作用。
根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有
(1)2,6-二氯靛酚法 (还原型VC)
(2)2,4-二硝基苯肼法 (总VC)
(3)碘酸法
(4)碘量法
(5)荧光分光光度法
一、2,6-二氯靛酚滴定法
1、原理:
还原型抗坏血酸还原染料2,6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失。还原型
抗坏血酸还原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样
品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
2、试剂
⑴ 1%草酸溶液:称取10g草酸,加水至1000ml;
⑵ 2%草酸溶液:称20g草酸,加水至1000ml;
⑶维生素C标准液:准确称20mgVC溶于1%草酸中,并稀释至100ml,吸5ml于50ml容量瓶中,加入1%草酸至刻度,此溶液每毫升含有0.02mgVC;
⑷ 0.02%2,6-二氯靛酚溶液:称取2,6-二氯靛酚50mg,溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中,冷却后,稀释至250ml,过滤于棕色瓶中,贮存于冰箱内,应用过程中每星期标定一次。
标定一:吸标液(VC)5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%淀粉3滴→用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色。
计算:
抗坏血酸浓度(mg/ml)=(V1 × 0.088)/V2
V1 -滴定时消耗0.001N KIO3标液的体积(ml)
V2-维生素C重量(g)
0.088-1ml0.001N KIO3标液≈维生素C的量(mg/ml)
标定二:吸5ml已知浓度V C标液→加5ml1%草酸→用染料2,6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色,在15秒不褪色为终点
计算:每毫升2,6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度(T)
T= (C× V1)/ V2
C - 维生素C的浓度(mg/ml)
V1-维生素C的体积(ml)
V2-消耗2,6-二氯靛酚的体积(ml)
⑸ 0.001N KIO3标液:吸0.1NKIO3溶液5ml→于500ml容量瓶内→加水至刻度,每毫升相当于VC0.008mg;
⑹ 0.5%淀粉溶液;
⑺ 6%KI溶液;
3、操作方法
⑴提取:称样50g→加2%草酸100ml→到入捣碎机中→处理→过滤→颜色若深可加白陶土
⑵滴定:吸5ml样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色
计算:
VC(mg/100g)=(V ×T)/W ×100
V -消耗染料体积(ml)
T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数
W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数
4、注意事项
⑴ 所有试剂的配制*好都用重蒸馏水;
⑵滴定时,可同时吸二个样品。一个滴定,另一个作为观察颜色变化的参考;
⑶样品进入实验室后,应浸泡在已知量的2%草酸液中,以防氧化,损失维生素C;
⑷贮存过久的罐头食品,可能含有大量的低铁离子(Fe2+),要用8%的醋酸代替2%草酸。这时如用草酸,低铁离子可以还原2,6-二氯靛酚,使测定数字增高,使用醋酸可以避免这种情况的发生;
⑸整个操作过程中要迅速,避免还原型抗坏血酸被氧化;
⑹在处理各种样品时,如遇有泡沫产生,可加入数滴辛醇消除;
⑺测定样液时,需做空白对照,样液滴定体积扣除空白体积。
二、2,4-二硝基苯肼法
可测总抗坏血酸,总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,然后与2,4-二硝基苯肼作用,生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比,将红色脎溶于硫酸后进行比色,由标准曲线计算样品中总VC。
1、原理:
用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,在继续氧化为二酮古乐糖酸。
二酮古乐糖酸与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎,其成色的强度与二酮古乐糖酸浓度呈正
比,可以比色定量。
2、步骤
⑴样品处理与分析
称一定样→加等量2%草酸→于高速捣碎机捣碎→取匀浆20g →用1%草酸定容100ml →过滤→取滤液10ml →加1%草酸10ml →加少量活性炭→摇1分钟→静置过滤→各取滤液2ml于样品管和样品空白管→各管加入1滴硫脲溶液→于样品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5ml →分别于两个管加盖→于37℃保温箱3小时→取出后样品管放入冰水中→样品空白管取出后冷至室温→在样品空白管加入2,4-二硝基苯肼→ 0.5ml →样品管和空白管都于冰浴中→滴加85%H2SO42ml于各管中→边滴边摇→防止温度升高炭化后呈黑色→冰浴中30分钟后取出→室温下放置30分钟后,在540nm测消光值,从标准曲线上查出相应的含量
⑵标准曲线的绘制
取5个50ml容量瓶编号 1 2 3 4 5
加VC标液0.2mg/ml 10 20 30 40 50ml
取5个比色管取相应 2 2 2 2 2
加硫脲溶液(滴) 1 1 1 1 1
2,4-二硝基苯肼(ml)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
于37℃保温箱3~4小时,取出于冰浴中,然后滴加85%硫酸2.5ml→取出放30分钟→在540nm下测各消光值绘标准曲线,同时做空白。
计算:每百克食品中抗坏血酸的毫克数=C/W *100
您可能会对本公司的以下产品感兴趣:
定氮仪∣全自动凯氏定氮仪∣索氏抽提器∣索氏抽提仪∣蛋白质测定仪∣马弗炉∣可见分光光度计∣紫外可见分光光度计∣火焰分光光度计∣水分测定仪∣水份测定仪∣火焰光度计∣电子天平∣旋转蒸发器∣索氏提取仪∣超级恒温槽∣低温恒温槽∣分光光度计∣电导率测定仪∣pH计∣旋转式粘度计∣氮磷钙测定仪∣白度测定仪∣旋光仪∣阿贝折射仪∣白度仪∣紫外分光光度计∣比较测色仪∣旋转式粘度计∣旋转蒸发仪∣纤维素测定仪∣箱式电阻炉∣凯氏定氮仪∣脂肪测定仪∣粗纤维测定仪∣索氏提取器∣快速水分测定仪∣消化炉∣水分快速测定仪∣凯式定氮仪∣罗维朋比色计∣马福炉∣粉碎机∣脂肪测定仪∣全自动凯式定氮仪∣水份快速测定仪∣消煮炉∣快速水份测定仪∣粗纤维测定仪∣粗脂肪测定仪∣全自动定氮仪