食品中山梨酸苯甲酸含量的测定方法

本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸苯甲酸含量的测定方法。
本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸苯甲酸含量的测定。
*低检出浓度：气相色谱法*低检出量为1μg，用于色谱分析的样品为1g时，*低检出浓度为1mg/kg。
**篇气相色谱法
2 原理
样品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。
3 试剂
3.1 乙醚：不含过氧化物。
3.2 石油醚：沸程30～60℃。
3.3 盐酸。
3.4 无水硫酸钠。
3.5 盐酸1＋1：取100mL盐酸，加水稀释至200mL。
3.6 氯化钠酸性溶液40g/L：于氯化钠溶液40g/L中加少量盐酸1＋1酸化。
3.7山梨酸、苯甲酸标准溶液：准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚—乙醚3＋1混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸或苯甲酸。
3.8山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚－乙醚3＋1混合溶剂稀释至每毫升相当于50，100，150，200，250mg山梨酸或苯甲酸。
4 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。
5 分析步骤
5.1 样品提取
称取2.50g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸1＋1酸化，用15，10mL乙醚提取两次，每次振摇1min，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中。合并乙醚提取液。用3mL氯化钠酸性溶液40g/L洗涤两次，静止15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取5mL乙醚提取液于5mL带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚－乙醚3＋1混合溶剂溶解残渣，备用。
5.2 色谱参考条件
5.2.1色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长2m，内装涂以5%m/mDEGS＋1%m/mH3PO4固定液的60～80目Chromosorb WAW。
5.2.2 气流速度：载气为氮气，50mL/min氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各自的*佳比例条件。
5.2.3 温度：进样口230℃；检测器230℃；柱温170℃。
5.3 测定
进样2μL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。
同时进样2μL样品溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。
5.4 计算

式中：X1——样品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg；
m1——测定用样品液中山梨酸或苯甲酸的质量，μg；
V1——加入石油醚－乙醚3＋1混合溶剂的体积，mL；
V2——测定时进样的体积，μL；
m2——样品的质量，g；
5——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL；
25——样品乙醚提取液的总体积，mL。
由测得苯甲酸的量乘以1.18，即为样品中苯甲酸钠的含量。
结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。
5.5 允许差
相对相差≤10%。
5.6 其他
在色谱图中山梨酸保留时间为2分53秒；苯甲酸保留时间为6分8秒。
(图略)
**篇LC-500A高效液相色谱法
6 原理
样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
7 试剂
方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。
7.1 甲醇：经滤膜0.5μm过滤。
7.2 稀氨水1＋1：氨水加水等体积混合。
7.3 乙酸铵溶液0.02mol/L：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜0.45μm过滤。
7.4 碳酸氢钠溶液20g/L：称取2g碳酸氢钠优级纯，加水至100mL，振摇溶解。
7.5苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液20g/L5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。
7.6山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液20g/L5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。
7.7苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL。经滤膜0.45μm过滤同时测定糖精钠时可加GB/T5009.28中3.4糖精钠标准储备溶液。
8 仪器
高效液相色谱仪带紫外检测器。
9 分析步骤
9.1 样品处理
9.1.1汽水：称取5.00～10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水1＋1调pH约7。加水定容至10～20mL，经滤膜0.45μm过滤。
9.1.2果汁类：称取5.00～10.0g样品，用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜0.45μm过滤。
9.1.3配制酒类：称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜0.45μm过滤。
9.2 高效液相色谱参考条件
9.2.1 色谱柱：C18 4.6mm×250mm 5μm不锈钢柱。
9.2.2 流动相：甲醇：乙酸铵溶液0.02m0l/L5：95。
9.2.3 流速：1mL/min。
9.2.4 进样量：10μL。
9.2.5 检测器：紫外检测器，波长230μm，灵敏度0.2AUFS。
根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
9.3 计算

式中：X2——样品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg；
m3——进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg；
V4——进样体积，mL；
V3——样品稀释液总体积，mL；
m4——样品质量，g。
结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。
9.4 允许差：相对相差≤10%。
9.5 其他
同GB/T 5009.28的5.6。
注：本方法可同时测定糖精钠。
 
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