试 剂
标准空白管
葡萄糖标准管
样品空白管
样品测定管
葡萄糖标准液
——
0.1~0.5
样品提取液
0.5
水
补至0.5
酶溶液
5
酶空白液
上述试剂混合后37℃ 水浴反应 15 min, 625 nm 测定吸光度值。(注意:葡萄糖与酶溶液的成色反应与反应时间密切相关,如反应时间过长,溶液颜色会由蓝转变成灰色,并慢慢产生沉淀,所以反应时间应严格控制好。)6.计算根据吸光度值求出葡萄糖标准曲线的回归方程,采用插入法求出样品测定管中葡萄糖含量,再根据稀释定容体积和称样量,计算出样品中葡萄糖含量。计算公式:X= (As-Ab)×V×F×0.10.5×m式中:X——样品中葡萄糖含量,g/100g;As—— 由标准回归方程求出的样品测定管中葡萄糖含量,mg;Ab——由标准回归方程求出的样品空白管中葡萄糖含量,mg;V——样品定容体积,ml;F——稀释倍数0.5——测定时吸取样品提取液的体积,ml;m——样品质量,g;0.1——将mg/g转换成g/100g的系数。7.注意事项(1) 此方法中的酶溶液只能和葡萄糖反应,特异性强,灵敏度高。(2)如果样品提取液为无色,无需做样品空白。但是有些样品颜色很深,如饮料、菌藻类食物,或样品提取液浑浊,往往干扰测定结果但又难以去除,所以测定这类样品时需做样品空白管以减少干扰。
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