高效液相色谱法测定术后饮中橙皮苷的含量

 摘要：橙皮苷为维生素P类药，用于增强****的韧性。橙皮甙的衍生物甲基橙皮甙，也是维生素P类药，是日本《食品添加物公定书》中收载的品种。是**高血压和心肌梗塞的**，医药工业中用作制药的原料，是中成药脉通的主要组成之一。

      目的建立术后饮中橙皮苷含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为CenturySILC18-AQ（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（21∶79），流速为0.8mL/min，检测波长为284nm，柱温为室温，进样量为20μL。结果橙皮苷浓度在1.004～10.04μg范围内线性关系良好，平均回收率为98.59%，RSD＝0.72%。结论方法简便、准确、重复性好，可作为术后饮中橙皮苷的含量测定方法。

      「关键词」高效液相色谱法；术后饮；橙皮苷；含量测定Keywords：HPLC；Shuhouyin；hesperidin；contentdetermination术后饮系甘肃武威肿瘤医院研制的医院制剂，是由**参、白花蛇舌草、陈皮、甘草等药味制成的合剂，具有补气**、**宽中、降逆下气的功能，用于手术后气血亏虚所致的腑气不通诸症的**。经过临床多年使用，疗效显著。为控制其质量，参考文献[1-6]，采用高效液相色谱（HPLC）法对方中君药陈皮的主要有效成分橙皮苷进行了含量测定，结果方法简便、准确、重复性好，为术后饮质量标准的研究与指标的制定提供了试验依据。

      1仪器与试药SSIPC-2000型高效液相色谱仪，Model500紫外检测器，7725i手动进样阀，分析之星色谱工作站；XT120A电子分析天平（瑞士普利赛斯）；HS10260D超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）。

      橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110721-200512，供含量测定用）；术后饮样品及缺陈皮的阴性对照样品均由甘肃武威肿瘤医院提供（批号060810，060812，060815）。水为重蒸馏水，乙腈为色谱纯，聚酰胺为层析用试剂（80～100目），其余试剂均为分析纯。

      2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：CenturySILC18-AQ（250mm×4.6mm，5μm，大连江申分离科学技术公司）；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（21∶79）；流速：0.8mL/min；检测波长：284nm；柱温：室温；进样量：20μL。在上述色谱条件下，橙皮苷与相邻峰达到基线分离，且阴性对照无干扰，峰形对称，分离效果良好。色谱图见图1。

      2.2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品25.1mg，置25mL量瓶中，加甲醇适量，超声助溶，然后用甲醇溶解至刻度，摇匀，配成浓度为1.004mg/mL的甲醇溶液，精密吸取2mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

      2.3供试品溶液的制备精密量取本品10mL，置具塞锥形瓶中，加硅藻土5g，搅拌均匀，烘干，精密加入甲醇120mL，称定重量，充分搅拌，超声40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液100mL置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用70%乙醇100mL使溶解并转移至分液漏斗中，加石油醚（60～90℃）萃取3次（50、30、20mL），弃去石油醚液，分取70%乙醇液置蒸发皿中，蒸去乙醇，剩余水液上聚酰胺层析柱（1cm×25cm层析柱，称聚酰胺1.8g，湿法装柱），先用20mL水冲洗（6mL/min），再加入70mL甲醇冲洗，收集甲醇液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中，用0.45μm微孔滤膜过滤后备用。

      2.4线性关系考察精密吸取上述橙皮苷浓度为1.004mg/mL的甲醇溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下分别进样20μL，测定。以峰面积对浓度进行线性回归，得回归方程为：A＝27248838.6C＋91201.7，r＝0.9997。表明橙皮苷浓度在1.004～10.04μg范围内线性关系良好。

      2.5精密度试验精密吸取对照品溶液20μL，重复进样5次，计算5次峰面积的RSD＝0.83%。

      2.6稳定性试验取室温放置的对照品溶液，在上述色谱条件下，于0、1、2、4、8、24h分别进样20μL，测定峰面积的RSD＝0.71%，表明橙皮苷甲醇溶液在24h内稳定。

      2.7重复性试验精密量取供试品（批号060812）10mL各5份，按“样品测定”项下操作，计算含量，结果分别为0.2161、0.2149、0.2181、0.2185、0.2171㎎/mL，平均含量为0.2169mg/mL，RSD＝0.94%。