1 活体电穿孔法在基因**方面的应用
原来在基因**中利用活体电穿孔法将抗体或化疗**导入肿瘤中,促进抗体和化疗**的运送来进行**,现在则以特异的外源基因替代了抗体的应用,简化操作步骤同时降低了费用。
首先,在皮肤瘤和脑瘤的**中,电穿孔法可有效地将**基因导入**部位。电穿孔法导入人单核细胞趋化物蛋白基因到大鼠脑瘤后,该蛋白在肿瘤的局部表达,同时在基因导入的部位可观察到巨噬细胞和白细胞的聚集。
同时有科学家从另一角度研究电穿孔对**肿瘤方面的作用,利用高电场强度的陡脉冲促使肿瘤细胞发生不可逆性电击穿而*终死亡,这种方法很适于局部组织肿瘤的**。
此外,活体电穿孔法还可以参与癌症的**,通过活体电穿孔法将基因导入机体后,导入组织可成为分泌抗体等物质的临时分泌器官,以抵**细胞的侵蚀或代偿由于癌细胞的侵蚀而造成的机体多种生理机能的丧失。
除了可以利用活体电穿孔法对肿瘤进行局部**外,还可以**机体的***系统和**系统的**。可在机体局部以活体电穿孔法导入编码分泌型蛋白的基因,这种重组的**蛋白可以随着血液循环分布到全身各种组织和细胞进行**。如在活体电穿孔骨骼肌导入EPO 基因后,可通过红细胞比容值检测到EPO 基因表达产物的增加。Yasui 等在小鼠体内检测到活体电穿孔法导入的胃泌素基因的表达产物和人的单克隆抗体。
在不远的将来,研究人员可以选择机体的一种组织的某个位置作为活体电穿孔的靶位点,将**基因从该位点导入进而表达,因此又可以把这个特殊的组织当作机体的一个人造的***或**组织,对病人进行相应的**。活体电穿孔法可对系统**产生作用并且**有效。将不同类型的耐药基因同时导入造血细胞,以扩大耐药范围和进行体内选择是基因**的重要策略,这类载体基因片段大多较长,进行传统基因导入有一定的难度。有报道可以用活体电穿孔法将醛脱氢酶基因和多药耐药基因共转移并在PA317 细胞中获得高效表达,转导率达98 % ,测定**蛋白表达较常规方法增高4 倍。此外电穿孔法有很高的经皮促渗作用,可进行很多经皮给药的**。
2 基因**中外源基因表达的调控
研究人员大都不希望导入的外源基因过度表达,尤其在基因**中,我们希望外源基因表达的诱导和抑制能够得到控制。目前这方面的研究主要包括两个方面:效应元件调节和生理活动调节。效应元件的作用,例如类固醇类**诱导的效应元件中,在卵清蛋白启动子5′远端019kb 处有一个雌**效应元件,将具有此元件的基因导入成年母鸡后,在其皮下注射糖皮质**和雌**,便可诱导外源基因的高效表达,表达量较未经**诱导的对照组增加10 倍。