产品名称：脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测

订货号：	R5903
产品名称：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测 （5分钟）
产品英文名称：	DON Express
包装：	32次检测
产品介绍：	无
产品说明：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测 （5分钟） 半定量分析

订货号：	R5902
产品名称：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 （15分钟）
产品英文名称：	FAST DON
包装：	48次检测
产品介绍：	请联系我们
产品说明：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 （15分钟） AOAC 认证方法

订货号：	R5901
产品名称：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 （15分钟）
产品英文名称：	FAST DON
包装：	96次检测
产品介绍：	请联系我们
产品说明：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 （15分钟） AOAC 认证方法

订货号：	R5906
产品名称：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇 （高灵敏度）
产品英文名称：	DON
包装：	96次检测
产品介绍：	无
产品说明：	脱氧雪腐镰刀菌烯醇 （高灵敏度） 单克隆抗体

呕吐**高灵敏度检测试剂盒

RIDASCREEN? DON

酶联**分析快速定量测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇**试剂盒德国R-Biopharm制造（中文翻译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准）。

RIDASCREEN? DON（产品编号：R5906）

1. 用途

   RIDASCREEN? DON采用竞争性的酶**分析法定量分析谷物、麦芽、啤酒及饲料中的呕吐**。试剂盒中含有酶**分析法所用的所有的试剂。试剂盒可以进行96个试验，包括标准。定量分析要求使用酶标板读数仪（含450nm波长）。

2. 概要

化学上称作脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）的呕吐**（Vomitoxin）属于霉菌的单端孢菌素族，是由几种粉色镰刀霉**属产生的。玉米中*容易产生这种**，通常在欧洲及北美发现的三种**是脱氧雪腐镰刀菌烯醇， 3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇，15脱氧雪腐镰刀菌烯醇。呕吐**在小麦、玉米以及稻米中的含量通常是mg/kg级的，由于他们高的细胞**及**抑制性质，对人类及动物构成了健康威胁。使用RIDASCREEN? DON 试剂盒可以检测谷物、玉米、大麦及饲料样品中的呕吐**，具有快速、准确的优点。

3.测定原理

测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对呕吐**小鼠IgG的捕捉抗体。加入呕吐**抗体，酶标记物，标准或样品溶液。游离呕吐**与酶标记物竞争呕吐**抗体，同时呕吐**抗体与捕捉抗体连接。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将红色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色产生变化。在450nm处测量，吸收光强度与样品中的浓度成反比。

4.  提供的试剂

每一个盒中的试剂足够进行91个测量（附加5个标准分析孔），盒中的材料如下：

1 X 96孔板（12条X 8孔，可以拆分为单孔）包被有捕捉抗体

5 X 标准液， 1.3ml/瓶， 为呕吐**标准溶液

标准液浓度为：0ppb；3.7ppb；11.1ppb；33.3ppb；100ppb 

1 X 呕吐**抗体溶液（6ml）小鼠单克隆………………黑色帽

1 X 酶标记的呕吐**（6ml）……………………………红色帽

1 X 基质/发色剂（12ml）………………………………白色滴瓶

1 X 反应停止液1M硫酸（12ml）………………………黄色滴瓶

1 X 洗液：10mM的磷酸盐缓冲液（PH 7.4）含有0.05%的Tween20

5.  需要的材料但盒中不提供

5.1设备

－－－－微孔板酶标仪（450nm）定量分析用

－－－－振荡器

－－－－粉碎机

－－－－50ul， 100ul， 1000ul微量加样器

－－－－100ml，1L量筒

－－－－50ml 漏斗及容量瓶

－－－－Whatman ****或相当的滤纸

5.2 试剂

－－－－蒸馏水或去离子水

6. 操作者应该注意之事项

－－－－标准液含有呕吐**，应特别小心

－－－－使用过的玻璃容器及呕吐**溶液*好用pH 7的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡过夜

－－－－反应停止液为1M硫酸，避免接触皮肤

－－－－不要使用过了有效日期的试剂盒， 稀释或搀杂使用会引起 灵敏度的降低

－－－－不要交换使用不同批号的盒中试剂

7. 储存条件

－－－－保存试剂盒于2-8℃。不要冷冻

－－－－基质/发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下

－－－－将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封

8. 试剂变质的迹象

红色的基质/发色剂变为蓝色，表明基质/发色剂变质，应当弃之。

0标准的吸光度值小于0.6个单位（A450nm<0.6）时，表示试剂可能变质。< span="">

9. 样品处理

样品应当在暗处及冷藏保存

9.1谷物、麦芽、饲料

－－－－粉碎5g有代表性的样品与25ml蒸馏水混合

－－－－强力振荡3分钟

－－－－用Whatman No.1滤纸过滤

－－－－取50ul稀释液进行分析

根据需要可以增加样品量，但溶液的量也应相应增加（例如：样品50g+1000ml蒸馏水）

9.2 啤酒

－－－－取足够量的啤酒样品，除去过量的CO2

例如：搅拌啤酒样品，直至不产生明显的气泡。如果啤酒样品产生混浊，在除去过量的CO2之后，建议在样品检测之前，要进行无菌过滤。

9.3麦芽汁

－－－－取50μl样品到每个微孔板底

如果样品产生混浊，建议在样品检测之前，要进行无菌过滤。

10. 酶标**分析程序

10.1测定之前注意事项

1. 使用之前将所有试剂回升至室温（20-25℃）。

2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8 ℃。

3. 如果样品量大建议使用多通道移液器，在使用中不要让微孔干燥。

4. 在EIA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。

5. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖子盖住微孔。

10.2包被有抗体的微孔板条

锡箔袋沿横向压皱外边打开。取出需用数量的微孔板及框架， 将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封， 保存于2-8℃。不要冷冻。

10.3标准液

呕吐**标准液为直接应用液。

10.4制备洗液缓冲液

方法一： 

试剂盒中装有磷酸盐小袋，每个小袋用1L蒸馏水溶解，溶解的洗液在4oC条件下可以保存4周。

方法二：

将磷酸盐每小袋只用100ml蒸馏水溶解，这样可以得到一个10倍的缓冲液浓缩液。这种溶液在室温（18-22°C）下，可保存8周。

使用时，1倍的浓缩液+9倍的蒸馏水稀释即可得到待用的洗涤缓冲液。

10.5测定程序（在18-24℃条件下操作）

1. 根据样品量将足够数量的孔条插入微孔架，记录样品及标准位置。

2. 加入50ul的标准或处理好的样品到各自的微孔中，每个标准和样品必须使用新的吸头。

3. 加入50ul酶标记物到微孔底部（红色盖）。（注意移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染。）

4. 加入50ul抗体溶液（黑色盖）到每一个微孔底部，充分混合，在室温（20-25°C）孵育30（+/-1）分钟。（注意此操作步骤要快，尽量保持前后孔孵育时间的一致，如果实验所用孔数量多，请用多通道移液器。移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体）。

5. 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用洗瓶或多通道移液器将250ul洗涤缓冲液加入孔中。再次倒出孔中的液体，完全除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤两次以上。（移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免污染洗涤液造成洗板不彻底。洗板后要立即进行下一步操作，避免板孔干躁造成重复性差）。

6. 加入 2滴（或100ul）基质/发色试剂（白色滴瓶）到微孔中， 充分混合并在室温（20-25℃）暗处孵育15（+/-0.5）分钟（注意此操作步骤要快，尽量保持前后孔孵育时间的一致，使用多通道移液器加液，移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体）。

7. 加入 2滴（或100ul）反应停止液（黄色滴瓶）到微孔中混合好， （注意此操作步骤要快，如果实验所用孔数量多，请将所需数量的滴瓶中液体转移至V型试剂槽中，并用多通道移液器加液。）在450nm处测量吸光度值以空气为空白，必须在加入停止液后10分钟内读取光度值。

11. 结果

定量分析：所获得的标准和样品吸光度值除以**个标准（0标准）的吸光度值再乘以100.因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值。

标准的吸光度值（或样品）

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－x 100=   %吸光度值

0标准的吸光度值

计算的标准值绘成为一个对应呕吐**浓度（?g/kg）的半对数坐标系统曲线图， 相对应每一个样品的浓度（?g/kg）可以从标准曲线上读出。

请注意：

为了获得样品的实际浓度，从曲线上读出的数据，要乘以相应的稀释系数。

谷物、大麦、饲料………………………………5

啤酒………………………………………………1

麦芽汁……………………………………………1

12. 特异性

RIDASCREEN? DON试剂盒的特异性通过对相应的**进行交叉反应性分析而得到的。

交叉反应

13. 再现性

由三个不同的实验结果确定了室内精密度，图2显示出RIDASCREEN呕吐**试剂盒的精密度情况， 获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应呕吐**浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。

14. 检测下限

谷物、大麦、饲料………………………………18.5?g/kg

啤酒………………………………………………3.7?g/kg

麦芽汁……………………………………………3.7?g/kg

15. 参考文献（略）