在无菌洁净室内进行生产制造时，必须确保在洁净室内使用的各种消耗品的洁净度，因为它们洁净程度对环境或产品造成危害是十分严重的，例如手帕、手套、拖把、管道等。要保证*终产品的无菌状态，在无菌状态进行加工生产，其效果远远好于生产完成后再进行**处理。在无菌环境内，若使用已经被污染的消耗品，很可能会导致整个生产加工过程的失败。
在生产中可以采用多种方法对产品进行**，如高压蒸汽**、电子束**和伽马辐射**。每一种**方法都有它自身的优点和缺点，对于某些方面是适用，但对另一些方面就不适用。
高压蒸汽**器使用蒸汽和高压对产品进行**。这种**方法的缺点是许多产品在进行高压蒸汽**前需要二次包装，并且这些包装袋必须具有渗透性。显然，在加工过程中增加了作业的时间和产品的成本。然而，对于那些拥有自己设备的厂家，使用高压蒸汽**方法成本比较合理，特别是当对小批量产品进行**时会采用该方法。
电子束**方法的穿透能力相对较低，因而只能用于低密度产品**。
伽马辐射**方法的穿透能力较高，因而成为高密度产品和大批量产品优选的**方法。这种方法能够有效地消灭遍布产品及其包装上的微生物，而温度只有少许变化。由于伽马射线的穿透特性，产品可以使用非穿透性包装。这种**方法广泛应用在各种各样的行业，例如食品、化妆品、医疗器械和药品。
伽马射线由钴60放射源产生并且容易电离。辐射电离的过程可产生足够的能量来改变原子或分子结构中电子的运动轨迹，但是又不会在产品内产生放射能。电离辐射对于微生物具有致命的杀伤效果。因批次与批次之间的产品**效果变化*小，所以伽马辐射**方法是可靠的**方法（见图1）。
图1 伽马射线由钴60放射源产生。
照片由STERIS Isomedix Services
公司提供。
仅用辐射还不够
“辐射”和“**”这两个词是不能相互代替的。单独进行辐射这种方法，并没有得到美国食品和药品监督管理局及大多数药品生产厂家的认可，将它作为**的证明。辐射仅仅表明产品被暴露在伽马射线下，它不能提供任何证据，表明一个产品接受了有效的照射剂量，达到了无菌状态，并且不能计算出无菌保证等级（SterilityAssurance Level，SAL）。
ANSI/AAMI/ISO都不推荐使用生物指示剂进行无菌确认和加工过程控制。由于需要太多数量的检测样本，导致不可能进行SAL低于10-2（例如10-3、10-4等等）的无菌状态测试，10-6的SAL要求一百万个检测样本中允许有一个带菌样本。为了证明达到10-6的无菌置信水平，需要将一百万个样本先进行无菌处理然后再进行无菌检测。很显然，这是不切实际的。
ANSI/AAMI/ISO已经制定了国际标准用来确认**过程，即提供必要的文件来证明所采用的**方法和过程。各种各样的**方法，适用于不同的产品及它们的特性。广泛使用的标准是11137-1994。欧盟（EU）也制定了标准：EN552:1994，当产品在全球范围内销售时，也应该考虑这个标准。幸运地是，在ANSI/AAMI/ISO标准和EU标准之间有一致的约定。确认过程必须包含产品未加工的原材料和组件、包装物的微生物**特性和进行生产、组装及包装产品的环境控制。
开始无菌确认过程之前，必须确定产品和包装能够经受得住辐射**方法，这一点十分必要。因为一些原材料暴露在放射源下会变的脆弱或退色，已经证明某些材料在这种情况下会影响它们的预期使用。可以将产品和包装暴露在不同的辐射水平下，然后在依据规范对产品进行检测来*终确定它所能承受的*大剂量。如果从外面购买包装物，可从供应商处得到有关密封完整性和包装物兼容性的数据资料。多数的包装产品供应商能够提供相关的合格证明或分解报告。
标准和指导方针
现有几个ANSI/AAMI/ISO的指导方针可以指导进行**过程的验证。应选择*适合你的产品和生产加工过程的标准来满足预期的SAL要求。ANSI/AAMI/ISO标准11137-1994中的方法1是被大家普遍采用的常规生产程序，包括利用抗生物负载原理建立的**剂量。AAMI/ISO13409标准一般适用于罕见的生产和证实25kGy的*小辐射剂量值。SAL水平不但应该进行选择，而且通常以产品的预期用途作为指导。对于入侵性医疗器械，一般公认的SAL水平是10-6，这是所应用的SAL水平中的***别。多数欧洲国家对于无菌产品的要求只认可10-6的SAL，因此*小剂量应依据产品购买国的标准。
执行*初的确认
本文中我们将集中探讨ANSI/AAMI/ISO11137中的方法1。从每三批即将进行**处理的产品中随机抽取10个样本进行生物负载研究。如果检测的项目非常大或者非常昂贵，那么将对部分项目样本（SIP）进行生物负载性
测试，然后对检测结果进行修正，作为全部产品的检测结果。生物负载性测试包括对活的生物体进行**、**培养和数目统计。对100个产品样本按照确认的剂量进行辐射**，以达到10-2级别的SAL。然后对100个样本进行无菌检测，如果有少于2个样本呈现阳性（非无菌），那么这个结果是可以接受的。SAL常规**剂量可以在原始的生物负载性检测结果的基础上计算得出。国际标准ANSI/AAMI/ISO11137 中提供了一个基于产品生物负载性的数据表格，其中列明了为达到选定的SAL水平而必需的剂量。
季度性核查
ANSI/AAMI/ISO 11137-1994标准中建议每间隔三个月对**剂量进行一次重新确认。规定的程序是从即将进行**的一批产品中抽取110个样品单元。10个样品单元进行生物负载检测，100个样品采用已确定的原始剂量设置中的确认剂量（10-2）。由于季节性波动、原材料和组件的变化、****或环境变化均可能引起生物负载性变化，通过检测这一变化确认校准过程。生物体对于辐射抵抗力的变化也会影响认证结果。季度性再确认*好应该包括某些类型包装的完整性检测（例如，爆裂检测，亚甲蓝染料检测或微生物**性试验等）。
生物负载恢复和**抑制/抑**测试
在*初确认中要求进行其他的几种检测。生物负载过程必须对生物体恢复的能力进行评估。一种确定生物负载取样方式有效的方法是将已知数量的生物负载接种到无菌单元上。按照取样方法进行就可得到确定的恢复率。恢复系数用来调整生物负载计数。例如，如果生物负载的恢复系数是80%，*初的生物负载计算结果是150，那么现在的计数结果应调整为188（150/0.8）。另外一种方法是进行重复性恢复过程，进行多次抽取样本的方法直到微生物的恢复率没有显著的增加为止。
美国药典(USP)中关于**抑制/抑制**（B/F）测试证明产品不能抑制微生物的生长，因此要去除无菌检测中的假阴性的可能性。在标准的无菌检测中，在产品上填加经过挑选的低水平的微生物，七天之内，检测结果显示阳性。检测样本中的生长情况表明在检测产品内或检测产品上不存在抑制物质。
照射工具
选择一种放射设备来对产品进行**处理时，应该考虑很多问题。所生产产品的类型、辐射成本和采用与已有设备相似的辐照器等，都是选择时应考虑的因素。你应该选择一种符合cGMP和ISO9000认证的放射产品。推荐大家对供应商进行审查，以便确保他们能够满足你的要求。应针对你的产品绘制放射设备的剂量图表，以便确定制动器或容器的位置、吸收*少数量射线的位置和吸收*大数量射线的位置。在一些特定区域放置放射量测定器，代表每一个包装结构的轴线。基于剂量图表的信息，可以确定产品的装载方式（见图2）。
图2 按照预先设定的装载方式
手提插入一个放射小室。照片由
STERIS Isomedix Services 公
司提供。
在使用说明书中详述了装载的结构并且每次装载都采用同样的方式。对于每次装载，在预先确定*小剂量和*大剂量的位置放置两个放射量测定器。另外还有放射指示剂限��。
注意观察放射指示剂十分重要。指示剂通常应用于总量控制，可以发现某些产品不能提供有效的**指示，它的确能迅速指示产品是否已经完成了放射循环。通常颜色指示剂的变化是放射后由黄色变为红色，然而应注意到pH的改变可能引起指示剂颜色的变化，这也十分重要。例如，在碱性环境中，包装指示剂的颜色可能在放射后变回黄色。
假如消耗品供应商提供了无菌证明（CoS），那么它应该包括必需的信息来证明产品已经按照经过确认的**过程进行**处理。CoS应该说明产品的数量、批量、放射运转数量、放射日期、陈述产品**的程度和**过程确认的方式、*大和*小剂量、批准者的签名和头衔，批准者应是质量检验机构代表。CoS将作为产品的无菌记录保存。
环境监控
环境和加工过程中的因素可能影响生物负载水平。因为这个原因，建议无菌洁净室消耗品的供应商应进行生产环境的检测，以便追踪潜在的污染物，例如人员、空气、表面、去离子水、设备表面、化学药品、零件、组件和原材料。例如，可以使用一个RCS空气取样器对空气的生物负载进行取样，空气中存在的任何微生物都有可能被吸取到取样器内部的培养基带上，然后对培养基进行**培养，以便计算生物负载性水平。
如果在无菌环境中进行生产制造，确定洁净室消耗品已进行有效的**处理是十分重要的。单纯对消耗品进行照射不能保证它们无菌。应对供应商索要每一批**产品的无菌证明，来保证消耗产品不但进行了辐射**，并且这个**过程已被确认符合ANSI/AAMI/ISO标准中的要求。