老牌分子生物学公司Fermentas于09年上半年推出了一系列神奇的FastDigest内切酶,用于快速的DNA消化。所有酶切均使用同一种缓冲液,在同一个温度下完成,操作简单、快捷!
过去在双酶切时,经常碰到两种酶“八字不合”,怎么也找不到合适的缓冲液,让两种酶的酶切活性都在80%以上。没办法,只能一个一个地来。一个切完,要电泳、沉淀、回收,时间长不说,那么点DNA,根本经不起折腾,回收个两次,粗条带变成细条带,细条带变成弱条带了,严重影响了下游实验。心痛啊,心痛。
现在可好了,所有172种FastDigest内切酶都使用一种通用的FastDigest缓冲液,且在缓冲液中的活性为100%,能够在5-15分钟内将DNA消化完全。这样,就可以在一个反应管内任意组合限制性内切酶,同时进行酶切,双酶切和多重酶切都不在话下,再也不用依次酶切了。
FastDigest内切酶能消化质粒、基因组和病毒DNA,以及PCR产物,即使孵育时间过长,也不会显示出星号活性。FastDigest**是您酶切操作的上上之选!
每个FastDigest内切酶会附带两种缓冲液:10×FastDigest Buffer和10×FastDigestGreenBuffer。所有FastDigest内切酶在这两种缓冲液中的活性为100%。后续分子生物学(如连接、平端化、去磷酸化)反应的酶在这两种缓冲液中的活性也是100%,这样你就不用担心染料会影响下游实验了。
绿色缓冲液中含有一种密度试剂和两种示踪试剂,方便在电泳过程中了解到大致进程。其中蓝色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移速率与3-5kb的DNA片段接近;而黄色染料在1%凝胶中的迁移速率与10 bpDNA片段接近。染料的存在不会影响DNA消化及下游的应用,但会阻碍产物的荧光激发。因此在荧光分析时还是推荐无色的缓冲液。
目前的FastDigest内切酶约有172种,队伍还在不断扩大中。如果你对如此方便快捷的内切酶还心存犹疑,可以向Fermantas公司及其代理商申请试用装,机会难得哦。