迅速实现基因沉默的新工具

Sigma-Aldrich公司近日在全球推出MISSION? esiRNA，一种基因特异的siRNA库，它为哺乳动物细胞中的RNAi筛选提供了一种强有力的方法。与传统的合成siRNA不同，esiRNA集合了数百个针对单个基因靶点的siRNA。这种新工具能避免鉴定有效siRNA的反复试验过程，迅速实现基因沉默，并确保脱靶效应*低。

此项技术与传统的单个siRNA介导的基因knockdown相比，优势相当明显。以前，我们需要反复试验，来鉴定出*有效的siRNA，现在有了这个siRNA的“超级库”，这一步都省了。此外，esiRNA还能确保*低的脱靶效应。esiRNA是由德国马普学会细胞生物学和遗传学（MPI-CBG）开发的。

MPI-CBG的课题组组长FrankBuchholz开创了esiRNA技术在RNAi筛选中的应用。他表示：“我们很高兴能与Sigma-Aldrich合作，让整个学术界都能享有esiRNA技术。10年前，esiRNA在美国旧金山加州大学的MikeBishop实验室中发明。自此，它就成为我的研究重点。Sigma-Aldrich在RNAi方面的丰富经验和产品线是我们生产高效特异esiRNA的**补充。”

哈佛大学医学院正在运用esiRNA来协助鉴定促使HIV增殖的人类基因。临床研究员AbrahamBrass博士认为MISSIONesiRNA的初步试验结果表明多个基因都能被非常有效地knockdown。哈佛医学院很快将会把此项技术整合到多项研究中。

esiRNA是由核酸内切酶制备的（下图）。首先用特异的引物扩增*佳的靶区域。序列经过验证后，利用RNA聚合酶产生300-600bp基因特异的双链RNA，随后用核酸内切酶切割产生短的dsRNA。这些类似siRNA的分子经过纯化，就形成了siRNA库，它们靶定了单个基因的不同序列。

MISSION esiRNA具有下列优势：

• 针对每个基因靶点的MISSIONesiRNA超级库
  
• 快速经济地完成初次筛选
  
• 有效的基因沉默
  
• esiRNA的knockdown效率高于70%
  
• 脱靶效应更低
  
• 大型RNAi筛选研究的费用更省
  

目前，MISSIONesiRNA有以下几种规格，满足不同实验的需求：

1. MISSIONesiRNA人基因组规模库，覆盖12000多个基因靶点
   
2. MISSIONesiRNA人激酶库，覆盖500多个基因靶点
   
3. 定制MISSION esiRNA库（20ug），适于10到1000个基因靶点
   
4. 单个MISSION esiRNA（20 ug或50ug），适于1到10个基因靶点

MISSION esiRNA的相关文献：

Theis, M. et al.Comparative profiling identifies C13orf3 as a component of the Skacomplex required for mammalian cell division. EMBO J. Apr23 (2009). [Epub ahead of print] Abstract

Kittler, R. et al.Genome-scale RNAi profiling of cell division in human tissueculture cells. Nat. Cell Biol. 9, 1401-12(2007). Abstract