代做实验慢病毒包装技术服务

一、慢病毒载体介绍 
   慢病毒载体（ Lentiviral vector, LVs ）是在 HIV-1 病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或 RNAi ）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链 RNA ，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为 DNA ，形成 DNA 整合前复合体，进入细胞核后， DNA 整合到细胞基因组中。整合后的 DNA 转录 mRNA ，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生 RNAi 干扰。 
    慢病毒载体介导的基因表达或 RNAi 干扰作用持续且稳定，原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。另外，慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比，比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有鲜明的特色。大量文献研究表明，慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。
    慢病毒载体不表达任何 HIV-1 蛋白，**原性低，在注射部位无细胞**反应，体液**反应也较低，不影响病毒载体的第 2 次注射。

1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。

2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。

3） 培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。

4） 病毒的纯化和浓缩。

5） 分装、- 80 ℃保存。

6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。

1） 直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合 RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 

2） 可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

3） 可用于基因敲除、基因**和转基因动物研究。

4） 无需任何转染试剂，操作简便。

5） 可以根据客户需要制备多种标记。

四、慢病毒载体应用
    1）将目的基因 /RNAi 基因转入难以转染的细胞，比如神经元细胞、干细胞或其它原 代细胞。
    2）将目的基因 /RNAi 基因转入动物组织，以期获得长期表达。
    3）构建稳定表达目的蛋白 /RNAi 的细胞系，再用 ex vivo 的方法导入动物体内。
    4）基因**。
    5）转基因动物。
    6）基因敲除。
    7）**研究：构建表达受体蛋白的细胞系，研究**的作用。
    8）快速建立生产目的蛋白的细胞系，非常有前途的真核细胞表达方法。