代做**组化（Ihc）病理技术服务
一、 **组化的意义
**组化技术是用标记物标记的抗体与组织或细胞的抗原反应，结合形态学检查，对抗原作定性、定量、定位检测的技术。现广泛应用的有酶**组化、**金银组化、**电镜技术等。
二、 **组化的原理
**组化是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。
三、 **组化的步骤
1、脱蜡、水化
60 ℃×20 min→Xylene 2 ×10 minutes；60℃×20分钟→二甲苯2 × 10分钟
100% absolute ethanol：2 ×5 minutes；100%的**乙醇:2×5分钟;
95% ethanol 2 minutes；95%的乙醇2分钟
80% ethanol 2 minutes；
70% ethanol 2 minutes；
distilled water:5 min；蒸馏水:5分钟
PBS洗3次×3 min。
2、细胞通透、封闭内源性过氧化物酶
用封闭通透液浸润切片30 min（RT避光）。配法是用预热40 ml PBS加120ul TritonX-100（曲拉通X-100又称清洁剂）加热几分钟后，临用前加400 ul 30％H2O2。
PBS溶液洗3次×3 min。
3、抗原修复暴露抗原决定族
切片放入0.01 M柠檬酸钠缓冲溶液（pH6.0）后，在微波炉里高火4 min至沸腾后，再加热约6 min×4次，每次间隔补足液体，防止干片
4、封闭非特异性蛋白
PBS溶液洗3次×3 min；
将切片取出,周围水分用滤纸吸干,用组化笔在组织周围画上圈,在圆圈内组织滴入5%羊血清（与二抗来源一致）后放入湿盒中,室温30（10～30）min；
5、一抗孵育
甩去切片上的羊血清,用滤纸擦干组织周围残留血清，直接加入已稀释的一抗（1：250、500、1000）后，放入湿盒中室温1小时，然后4度过夜，从冰箱中取出需37 ℃复温45 min。
6、二抗孵育
将一抗倒掉并用PBS洗5 min×5次；
用滤纸将圆圈周围的水吸去，加入已稀释的二抗后放入37 ℃恒温烤箱中30 min（回收）。
用PBS洗5次×5 min；
7、SP反应
加入SP后放入37度烤箱中30 min。
用PBS洗5次×5 min；
8、显色
加入DAB（快速滴入，观察染**况，倒掉染液），显色时间控制在约5 min（3～10 min），由镜下观察颜色控制时间。0.05％DAB（避光）（1:20储备液）：5 ul 20×DAB＋0.1 ul 30% H2O2＋95 ul PBS。1%DAB储备液的配制:50mg DAB+5ml 0.05 mol/L PBS充分溶解，-20 ℃保存。
9、复染、脱水、透明、封片
用PBS 3次×3min后，用双蒸水洗5 min；
加一大滴苏木素染液，胞核蛋白染几秒，胞浆或胞膜蛋白染20 s后自来水冲洗，双蒸水洗5 min，再用PBS返蓝5 min。
脱水 50% ethanol 1-2 min，
70% ethanol 1-2 min
95% ethanol 1-2 min；
95% ethanol 1-2 min；
100% absolute ethanol: (1-2) min；
100% absolute ethanol: (1-2) min。
透明：Xylene 1×(1-2) min→Xylene 2×(1-2) min
封片：中性树胶
四、 **组化的特点
1、特异性强
2、敏感性高
3、定位准确、形态与功能相结合
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