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**组化利用抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去**实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（**抗体）作为抗原去**动物制备**抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的**复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、**、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

1、将已**的20mm盖玻片置于90mm培养皿中，按2*104/ml的细胞密度将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，5天后进行**细胞组织化学染色鉴定。
2 、PBS清洗标本3次各2 min。
3 、4%的多聚甲醛固定15分钟；【冷甲醇：丙酮1：1】
4、空气干燥5min。
5、 PBS清洗标本3次各2 min。
6 、0.5%Triton X-100( DPBS配)孵育1次20 min。
7 、PBS清洗标本3次各2 min。
8、 3%H2O2孵育15 min。
9、 PBS清洗标本3次各2 min。
10、封闭血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液）20min。
11、一抗孵育（PBS配，滴度1：200，湿盒）4OC过夜
或37OC 60 min。阴性对照*好用一抗来源血清，否则用PBS液。
12 、PBS清洗标本3次各5 min。
13、二抗工作液孵育pv6001（湿盒）37OC 30 min。
14 、PBS清洗标本5次各2 min。
15、DAB显色（避光，镜下观察至棕色）约10~15min。
16、蒸馏水或自来水洗1次5 min。（可放六孔板内，再将孔板放在饭盒等内，自来水下冲洗）
17、苏木素复染10min。
18、自来水洗5min。
19、树胶封片。

1、苏木素复染时间需要摸索，尤其阳性染色也在细胞核上。

2、DAB显色时间需要达到*优化，镜下观察达到阳性染色明显但背景不太深。

3、抗体孵育时间和抗体浓度需要摸索。尤其一抗孵育*好在4度过夜。

4、切片脱蜡和水化要充分；加反应液时要覆盖组织充分；每次加液前甩干洗涤液，但又防止干片；用组化笔画圈时尽量画大一点，否则墨水排斥液体，引起片周边干片。