siRNA质粒载体构建
代做实验，siRNA质粒，实验外包
技术服务详细描述
RNAi (RNAinterference, RNA干扰)技术，即将与内源 mRNA 编码区同源的小片段（19 －23bp）外源双链 RNA（double s`tranded RNA ）导入细胞中，通过一系列细胞内反应引发细胞中相应 mRNA 的降解，从而导致特定基因表达沉默的一种技术。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段，有助于研究该基因在生物模型系统中的作用，是研究基因功能的重要工具，并且逐步成为病毒性**、遗传性**以及肿瘤等的基因**研究的一种手段。
siRNA构建技术服务
本公司提供siRNA 载体的构建服务，siRNA 载体可以在细胞内直接转录出 shRNA ，其干扰效果等同于siRNA ，而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所属物种，本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列，在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中**可以进行长期基因沉默研究的方法。
拜沃生物生物siRNA载体构建服务程序：
1. siRNA表达载体的选用：
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因，可以无限扩增。
2. 设计siRNA靶序列
A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19 － 21nt 长。
B 、对于每条选定的siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt) 相连，称为 shRNA（short hairpin RNA）。
C、阴性对照的设立.
3. 合成模板：
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后，1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。
5. 连接与转化：
把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37 ℃培养过夜。
6. PCR 鉴定
7. 测序鉴定
8.柱抽提阳性克隆载体并定量。
收费标准
| 个数 | 价格(￥) | 时间 |
| 1-3个siRNA表达载体构建 | 1800.00/个 | 14个工作日 |
| 4－10个siRNA表达载体构建 | 1500.00/个 | 20个工作日 |
| 10个以上 | 协商 | 协商 |
拜沃生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个.
上海拜沃生物科技有限公司
联系电话：021－51262103，021－51262102
传真：021－51262103
网址：www.biovol.net 网址：www.elisabio.com
联系人：黄力，业务qq: 769201598
公司对外邮箱： ，hyperheal@gmail.com
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上海拜沃生物科技有限公司专业生产人/小鼠/大鼠/兔等动物的**细胞分离液，主要包括：人/小鼠/大鼠/兔等动物的单核细胞分离，细胞分离液，**细胞分离液，单核细胞分离液，中性粒细胞分离液，内皮细胞分离液，干细胞分离液，NK细胞分离液，胰岛细胞分离液，白细胞分离液！
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