产品 资讯
请输入产品名称
噪声分析仪 纺织检测仪器 Toc分析仪 PT-303红外测温仪 转矩测试仪 继电保护试验仪 定氮仪
首页 产品 专题 品牌 资料 展会 成功案例 网上展会
词多 效果好 就选易搜宝！
首页 >>> 技术文章 >

技术文章

**组化染色呈阴性结果的原因有哪些？

    **组化实验及用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为**组织化学（immunohistochemistry）技术或**细胞化学（immunocytochemistry）技术。

    下面介绍下**组化方法的具体实验流程步骤。

    1）石蜡切片，常规脱蜡至水。

    2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。

    3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟

    4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次。

    5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。

    6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（*好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。

    7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h.

    8）PBS冲洗，3分钟×5次。

    9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h.10）PBS冲洗，3分钟×5次。

    11）显色剂显色（DAB等）。

    12）自来水充分冲洗。

    13）可进行复染，脱水，透明。

    14）选择适当的封片剂封片。

    **组化染色呈阴性结果的原因有哪些？

    1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液，怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果。另外，不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索*佳浓度。

    2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是*佳的时间和次数。若不行，还可高压修复。

    3、组织切片本身这种抗原含量低。

    4、血清封闭时间过长。

    5、DAB孵育时间过短。

    6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。

    7、开始做**组化，建议大家一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。

    以上就是“**组化染色呈阴性结果的原因有哪些？”的详细介绍，希望能够对大家有所帮助。另外我们公司代做**组化实验，更多详细信息可以直接咨询在线技术员。

上一篇： **组化所需实验试剂有哪些
下一篇：SCI论文代发：sci投稿经验总结