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**组化实验注意事项有哪些呢

**组化学技术按照标记物的种类可分为**荧光法、**酶法、**铁蛋白法、**金法及放射**自显影法等。那么，做**组化实验要注意哪些事项呢？希望下面的介绍能够对您有所帮助。

1、标本的固定

组织标本及时的取材和固定是做好**组化染色的关键**步，是有效防止组织自溶坏死，抗原丢失的开始。离体组织应尽快的进行取材固定，*好20分钟内，因为有些抗原若固定不及时可能就检测不到了。而对于固定液的选择，原则上讲，应根据抗原的耐受性来选择相应的固定液，但在病理常规工作中很难做到这一点，因为病理的诊断和鉴别诊断都是在常规HE病理诊断的基础上决定是否进行**组化的染色，而HE染色的常规组织处理是采用10%的中性缓冲福尔马林或4%缓冲多聚甲醛进行组织固定，利用其渗透性强，对组织的作用均匀进行固定。组织固定时间*好在6-24小时内，一般组织固定时间不应超过24小时，随着固定时间的延长对组织抗原的检出强度将逐渐降低。另外，非中性福尔马林缓冲液、含酸和含汞固定液亦可导致标记失败或减弱。

2、蜡块的选择

正确选择用于**组化的蜡块也是确保染色质量的关键因素之一。很多病例的组织蜡块不止一个，不同的蜡块中，组织成分常常并不完全一样，一般选择*具代表肿瘤特异性的蜡块，*好含有内对照。更值得注意的是，所选取的蜡块除了要包含代表肿瘤特异性的组织外，应尽量避免含有出血、坏死和脂肪组织。这些组织内的抗原大多已被破坏或丢失，*终通常呈片状弥漫染色，除影响制片的美观外，容易导致误判或误诊。而且这些组织通常影响切片的质量。另外，*好不要选择冰冻剩余组织或脱钙组织，冰冻或脱钙一般也会影响组织内的抗原。

3、修复方法的选择和对比

抗原修复是指石蜡切片**组化染色前用酶、表面活性剂或微波、金属盐等对被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原进行暴露和修复，使抗原性得到一定程度的恢复过程。修复的方法有酶（胰酶、蛋白酶等）消化、加热法（水浴、微波和高压煮沸等）和超声处理等，或者综合利用以上方法。目前*常用的是加热煮沸法，少数用酶消化法。大量实验表明，固定时间越长的标本，所形成的交联就越紧密，抗原就越难以被激活，所需的修复强度也就越强。各种修复方法染色强度的比较为：高压法>水浴法>微波法。在日常工作中，要根据不同抗原的特性选择合适的修复方法。抗原修复液常用的有枸橼酸缓冲液（pH 6.0）、EDTA缓冲液（pH 8.0~9.0）等。修复液的PH值对染色结果也会产生相当大的影响。研究发现在高PH值约pH8.0~9.0时，都有较好的染色结果，所以目前比较推崇的抗原修复液为高PH值的修复液，尤其是对核阳性的抗体。

4、确定阳性对照

**组化染色过程比较复杂、影响因素也很多，故应设置阳性对照和阴性对照。尤其是阳性对照尤为重要。阳性对照包括两种，一种为内对照，这是一种比较理想的对照，对照和测试组织都在同一张切片中，都处于相同的实验条件下，结果更可靠也更具有可比性。另一种称为外对照，有时在测试的切片中不存在已知的抗原，如在胃的标本中怀疑是恶性黑色素瘤，在正常的胃组织中本身不存在相关的抗原，如果病变出现阳性反应结果，尚能提示是恶黑，但是如果出现阴性结果，就无法确定是本身组织中不含黑色素瘤抗原，还是技术问题。因此，应另外设立一个已知的阳性对照。另外，比较简单的方法，是采用阑尾作为阳性对照。阑尾包含的组织种类较多，如有上皮、**组织、平滑肌、间质、神经、血管、间皮等。因此，一张阑尾切片可以检测大多数常用的抗体。

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