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实验外包-流式细胞仪的使用程序

实验外包-流式细胞仪的使用程序

流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节分辨率为零。

一．流式细胞仪开机程序

1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
　　2．打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
　　3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5～10分钟。排出过滤器内的气泡。
　　4．如果需要打印，打开打印机电源。
　　5．打开电脑，等待屏幕显示出标准的苹果标志。
　　6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡。
　　7．分析样品时，先用FACAFlow或PBS进行HIGHRUN约2分钟。

做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。

二．流式细胞仪预设获取模式文件（AcquisitionTemplateFiles）

1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
　　2．选取屏幕左列��图工具中的Dotplot，绘出一个或多个DotPlots（点图）。从DotPlot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
　　3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。
　　4．将此视窗命名后储存于FACStationG3\BDApplications\CELLQuestFolder\EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。

本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStationG3\BDApplications\CELLQuest\EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。

三．流式细胞仪用CELLQuest进行仪器的设定和调整

1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。
　　2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取ConnecttoCytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的AcquisitonControl对话框移至合适位置。
　　3．从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。
　　4．在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式（amplifiermode）：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的**细胞亚群时，FSC和SSC多以线性模式Lin测量，且DDMParam选择FL2，而FL1，FL2与FL3则以对数模式Log测量；分析细胞DNA含量时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3皆以Lin进行测量，且DDMParam选择FL2；分析血小板表型时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以Log进行测量。

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