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SCI论文翻译-TUNEL细胞凋亡原理
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细胞凋亡原理
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细胞凋亡原理
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基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL检测原理
TUNEL
细胞凋亡检测试剂盒是采用非同位素方法来检测细胞在凋亡过程中DNA 的断裂情况,可在原位快速准确地检测单个凋亡细胞。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。
其原理是细胞凋亡发生时,内源性核酸酶激活,使DNA的双链断裂或一条链出现缺口,产生一系列3’-OH末端,在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)作用下,组织细胞原位DNA切口可被标记上生物素-dUTP,即TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling),可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,显示为棕色(过氧化物酶活性),特异准确地定位正在凋亡的细胞,在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正的或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂,因而没有3'-OH 形成,很少能够被染色。
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