**分析中应用紫外分光光度法应注意的环节

[关键词] 紫外分光光度法；注意事项
    紫外分光光度(UV)法是通过被测物质在紫外光区的特定波长或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。紫外光谱是物质在200～400 nm的近紫外光区和400～800 nm的可见光区的吸收光谱。UV图提供两个重要数据：吸收峰的位置和光吸收强度。由于**分子中多含有紫外光区的生色基，因此紫外分光光度法广泛应用于药品检验。

使用UV法应注意以下环节：
    1 仪器的校正和检定
    1．1 波长 
    由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行**校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
    1．2 吸收度 吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
    1．3 狭缝宽度 
    选择仪器的狭缝宽度，应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于《中国药典》UV法测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如青霉素钾及钠的吸收度检查则需要1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。
    1．4 天平和玻璃仪器的检定
    所用的容量仪器及分析天平应经过检定，如有偏差应加上校正值。
    1．5 吸收池配对 
    石英吸收池对紫外光亦有吸收，1 em的吸收池在波长220～270 nm的范围内，以空气作为100％，其透光率往往小于100％，同时每个吸收池不可能完全相同，故在每次测定前应做吸收池配对试验。方法是取干燥洁净的吸收池，均装入测定用空白溶剂，以一只吸收池作空白，用测定时所用的波长测定其他吸收池的吸收度，*后选择吸收*小的一只作为配对，测定并记录下其它吸收池的吸收度，供试品液的实际吸收度应是与吸收池(有空白溶剂时)吸收度之差。为减少误差，常用一个配对杯测定若干样品(也减少计算麻烦)，但应注意换液时充分洗涤。
    2 对溶剂的要求
    由于溶剂与溶质分子间形成氢键、偶极化等的影响，可以使溶质吸收波长发生位移。通常极性溶剂比非极性溶剂的影响大，在选择溶剂时应予以注意。测定供试品前，应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否有吸收峰，是否影响供试品测定。每次测定时应采用同一厂家、同一批号的试剂配制混合均匀的同一批溶剂。
    3 检验
    3．1 溶液配制 
    称量应按药典规定进行。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5mL。含量测定供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作。每份结果对平均值的偏差应在4-0.5％以内。作鉴别或检查时可取样品1份。
    3．2 测定 
    除另有规定外，应在规定的吸收峰波长4-2 nm以内，再测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰***长应在该品种项下规定的波长4-1nm以内，否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度。取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。样品溶液的量以池体积的4／5为宜，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放人样品室时应注意每次放入的方向相同。使用后用洗涤剂及水冲洗干净，晾干防尘保存。吸收池如污染不易洗净时可用发烟硫酸+硝酸(3：1 )混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。
    3．3 读数 
    一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间为宜，吸收度在此范围误差较小.