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RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)服务|实验技术服务

关键词:RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)服务|实验技术服务
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RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时，我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面，我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE）是一种基于RT-PCR，在仅知目标基因部分表达片段的基础上，从低丰度的转录本中快速扩增其cDNA的5’和3’末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。RACE实验成功的关键在于高质量与完整性好的RNA以及特异性强的引物。我们采用国内目前应用*广的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit（CLONTECH）进行cDNA的5’和3’末端片段克隆。 *终，从2个有相互重叠序列的5’和3’-RACE产物中获得全长cDNA；或者通过分析RACE产物的5’和3’端序列，合成相应引物扩增出全长cDNA。
与筛库法相比较，有许多方面的优点
1）此方法是通过PCR技术实现的，无须建立cDNA文库，可以在很短的时间内获得有利用价值的信息。
2）节约了实验所花费的经费和时间。
3）只要引物设计正确，在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长。
实验室现有的RACE试剂盒的简介
􀂙RACE是一种从一个相同的cDNA模板进行5‘和3‘末端快速克隆的方法。此方**产生较少的错误条带。此过程中使用的酶混合物非常适合长链PCR。
􀂙使用此方法的要**必须知道至少23－28个核苷酸序列信息，以此来设计5’末端和3‘末端RACE反应的基因特异性引物（GSPs）。
RACE引物的设计：
基因特异性引物（GSPs）应该是：
􀂙23－28nt
􀂙50－70％GC
􀂙Tm值≥65度，Tm值≥70度可以获得好的结果
需要实验者根据已有的基因序列设计5‘和3‘RACE反应的基因特异性引物（GSP1和GSP2).由于两个引物的存在，PCR的产物是特异性的。
有3种验证RACE产物的方法：
（1）比较由GSP和NGSP获得RACE产物。
（2）Southern blot
（3）克隆并测序
􀁻我们建议*好测得RACE产物的部分序列。有的时候需要嵌套引物的存在。
比较由GSP和NGSP获得RACE产物。
􀁻对于5‘末端的RACE产物，比较由AP1和GSP1扩增出来的产物和由AP1和NGSP1扩增出来的产物。
􀁻对于3‘末端的RACE产物，比较由AP1和GSP2扩增出来的产物和由AP1和NGSP2扩增出来的产物。这对于鉴定多条带是否是上一个PCR的特异性产物是非常有用的。
􀁻如果条带是正确的，在嵌套PCR反应中的条带应该是略微小一些。基本PCR和嵌套PCR产物的迁移率的不同取决于ｃＤＮＡ结构中GSP1和嵌套引物的位置。

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