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Southern Blot服务|实验技术服务

关键词:Southern Blot服务|实验技术服务
简介：世界**品牌Southern Blot服务|实验技术服务原装**，质量保证,价格优惠。
Southern Blot服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时，我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面，我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
一、待测核酸样品的制备
(一)制备待测DNA
基因组DNA是从动物组织(或)细胞制备。1.采用适当的化学试剂裂解细胞，或者用组织匀浆器研磨破碎组织中的细胞;2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白质和RNA;3.用有机试剂(酚/氯仿)抽提方法去除蛋白质。
(二) DNA限制酶消化
基因组DNA很长，需要将其切割成大小不同的片段之后才能用于杂交分析，通常用限制酶消化DNA。一般选择一种限制酶来切割DNA分子，但有时为了某些特殊的目的，分别用不同的限制酶消化基因组DNA。切割DNA的条件可根据不同目的设定，有时可采用部分和充分消化相结合的方法获得一些具有交叉顺序的DNA段。消化DNA后，加入EDTA，65℃加热灭活限制酶,样品即可直接进行电泳分离，必要时可进行乙醇沉淀，浓缩DNA样品后再进行电泳分离。
基本步骤
1. 如果靶序列>5kb，则需进行脱嘌呤处理。
(1) 把凝胶浸在0.25mol/L HCl中，室温轻轻晃动，直到溴酚蓝从蓝变黄。
注意:处理人类基因组DNA≤10分钟;处理植物基因组DNA≤20分钟。
(2) 把凝胶浸在灭菌双蒸水中
2. 如果靶序列<5kb，则直接进行下面的步骤
(1) 把凝胶浸在变性液(0.5mol/L NaOH，1.5mol/L NaCl)中，室温2×15分钟，轻轻晃动。
(2) 把凝胶浸在灭菌双蒸水中
(3) 把凝胶浸在中和液中(0.5mol/L Tris-HCl，pH7.5，1.5mol/L NaCl)，室温2×15分钟。
(4) 在20×SSC中平衡凝胶至少10分钟。
结果注意:
在膜上阳性反应呈带状。实验中应注意以下问题:转膜必需充分，要保证DNA已转到膜上。杂交条件及漂洗是保证阳性结果和背景反差对比好的关键。洗膜不充分会导致背景太深，洗膜过度又可能导致假阴性。若用到有毒物质，必需注意**及**。
主要应用:
1.遗传病诊断
2.DNA图谱分析
3.检测样品中的DNA及其含量
4.PCR产物分析

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